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3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法

(一期法)
本法系用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆为基质血浆,采用一期法测定供试品人凝血因子Ⅷ效价。
试剂 (1)3.8%枸橼酸钠溶液 称取无水枸橼酸钠9.5g,加水溶解并稀释至250ml。
(2)咪唑缓冲液(pH7.3) 称取咪唑0.68g和氯化钠1.17g,加水使溶解成100ml,加入0.1mol/L盐酸溶液42.2ml,再加水稀释至200ml,即得。
(3)稀释液 取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合,加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%。
(4)激活的部分凝血活酶(APTT)试剂。
(5)人凝血因子Ⅷ珊缺乏血浆 为人凝血因子Ⅷ含量低于1%的人血浆或人工基质血浆。
(6)0.05mol/L氯化钙溶液 称取氯化钙(CaCl2.2H2O)147g,加水溶解并稀释至1000ml,配制成1mol/L氯化钙贮存液。用前用水稀释20倍,配制成0.05mol/L氯化钙溶液。
人凝血因子Ⅷ标准品溶液的制备 用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆或生理氯化钠溶液将标准品稀释成每1ml含1IU凝血因子Ⅷ,再用稀释液分别做10倍、20倍、40倍和80倍稀释,置冰浴待用。
供试品溶液的制备 用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆或生理氯化钠溶液将供试品稀释成每1ml约含1IU凝血因子Ⅷ,再用稀释液做10倍和20倍或40倍稀释,置冰浴待用。
测定法 取激活的部分凝血活酶试剂0.1ml,置37℃水浴保温一定时间(一般4分钟),加入凝血因子Ⅷ缺乏血浆0.1ml、供试品溶液0.1ml,混匀,置37℃水浴中保温一定时间(一般5分钟),加入已预热至37℃的0.05mol/L氯化钙溶液0.1ml,记录凝固时间。
用不同稀释度的人凝血因子Ⅷ标准品溶液0.1ml替代供试品溶液,同法操作。
以人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(IU/ml)的对数对其相应的凝固时间(秒)的对数作直线回归,求得直线回归方程。计算供试品溶液人凝血因子Ⅷ效价,再乘以稀释倍数,即为供试品人凝血因子Ⅷ效价(IU/ml)。
【附注】(1)直线回归相关系数应不低于0.98。
(2)测定时要求每个稀释度平行测定2管,2管之差不得超过均值10%,否则重测。
(3)直接与标准品、供试品和血浆接触的器皿应为塑料制品或桂化玻璃制品。
(4)采用全自动凝血仪操作,按仪器使用说明书进行。

关键字:3521 凝血因子
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