您现在位置:兽药智库> 人药标准> 中国药典2015年版> 浏览文章
1219 生长激素生物测定法

1.去垂体大鼠体重法
本法系通过比较生长激素标准品(S)与供试品(T)对幼龄去垂体大鼠体重增加的程度,以测定供试品效价的一种方法。
标准品溶液的制备 试验当日,取标准品,按标示效价用含0.1%牛血清白蛋白的0.9%氯化钠溶液,制成高、低两种浓度的标准品溶液。一般高浓度标准品溶液配成每1ml含0.1~0.2IU,低浓度标准品溶液配成每1ml含0.025~0.05IU,高低两浓度比值(r)一般为1:0.25,标准品溶液分装成每天剂量并密封于-15℃以下保存,临用时融化。
供试品溶液的制备 按供试品的标示效价或估计效价(AT),照标准品溶液的制备及保存方法制备和保存。
测定法 取同一来源、品系,出生26~28天,体重60~80g,同一性别,健康的大鼠,试验前2~3周手术摘除垂体,手术后于屏障环境饲养使其恢复。
取去垂体手术后2~3周、体重变化小于手术前±10%的大鼠,按体重随机等分成4组,每组至少8只,每只编号并记录体重。分别自颈部皮下注射一种浓度的标准品溶液或供试品溶液0.5ml,每日1次,连续6日。于最后1次给药后24小时,处死大鼠,称体重,必要时实验结束后可进行尸检,切开蝶鞍区,肉眼检查有无垂体残留,剔除有垂体残存的大鼠。每只动物给药后体重增加的克数作为反应值。供试品与标准品各剂量组所致反应的平均值应相当。照生物检定统计法(通则1431)中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。
本法的可信限率(FL%)不得大于50%。
2.去垂体大鼠胫骨法
本法系通过比较生长激素标准品(S)与供试品(T)对去垂体大鼠胫骨骨骺板宽度增加的程度,以测定供试品效价的一种方法。
标准品溶液和供试品溶液的制备 同体重法。
测定法 本法可与去垂体大鼠体重法同步进行。待体重法实验结束后,取下两腿胫骨,置10%甲醛溶液保存,从胫骨近心端顶部中间沿矢状面切开,置10%甲醛溶液中保存,水洗10分钟后,置丙酮溶液中10分钟,水洗3分钟,置2%硝酸银溶液中染色2分钟,水洗后置水中强光照射至变棕黑色,于10%硫代硫酸钠溶液固定30秒钟,置80%乙醇溶液中供测量用。测量时沿刨面切lmm左右薄片,置显微镜下测量胫骨骨骺板宽度,作为反应值。照生物检定统计法(通则1431)中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。
本法的可信限率(FL%)不得大于50%。
关键字:1219 生长激素
网友留言