肝注射液（肝精）
Injectio Hepatis
本品为新鲜食用哺乳动物（牛、羊、猪）的肝脏中提得的一种耐热性抗贫血成分的灭菌水溶液。
常用制品：1 ml含2单位、5单位及15单位（每一单位相当于新鲜肝脏10 g），并得加酚、甲酚或其它适宜的抑菌剂。
【制法】
1.原料处理：将新鲜健康猪肝，剪除胆囊、输胆管、脂肪及结缔组织，在绞碎机上绞碎成浆状，先在0～2℃预冷4小时，然后在－12～一15℃速冻，猪肝内层温度不得高于－12℃。鲜肝低温保存期间不得高于－12℃。
2.提取：准确称取鲜肝175 kg（或冻肝浆150 kg），按原料重量加50%的水，用蒸汽加热，徐徐搅拌，使温度均匀上升，取原料重量千分之一的浓硫酸（化学纯）用水稀释后均匀加入，温度上升90～95℃，保温40分钟，在保温过程中搅拌3～4次，离心分离，滤渣按原料重量40%加水，进行第二次提取，方法同上，但不必加酸，将二次提取液经四层纱布过滤，得澄清滤液。
3.浓缩，萃取：将上述澄清滤液在70℃下、真空度保持650mm浓缩成饴糖状的肝膏（含水量为25～35%）。按肝膏重量加2倍量95%乙醇，使最后乙醇浓度达7O～75%（20℃时），搅拌l小时，放置过夜，虹吸出上清液；残渣再加一倍量80～85%乙醇使醇浓度达70～75%，搅拌30分钟提取两次，合并三次提取液，在60～65℃浓缩成浓缩肝膏。
4.盐析、洗涤：按浓缩肝膏重量加2倍量碱酸铵饱和溶液。开始应先少加，同时搅拌使膏全部成糊状，然后在搅拌下补足硫酸铵饱和液，速搅1分钟即停止，放置过夜，使盐析物上浮，离心甩干或压干。盐析物用无水乙醇洗2～3次。第一次乙醇用量为盐析物重的2倍，第二次和第三次为膏重的1倍。最终乙醇浓度应在90%左右。如用95%乙醇洗涤时，应为盐析物重的3～4倍。搅拌30分钟，放置过夜，虹吸。洗涤时，一定要把盐析物洗开，即洗至疏松、无大颗粒或硬块，烘干后将盐析物离心甩干。
5.溶解、浓缩：用于洗涤的盐析物按投科量3.5～4%逐渐加入75%乙醇，边加边搅拌，加完后搅拌30分钟，放置过夜，次日用滤纸过滤，取少量测S042－含量，按测定结果，加计算量的氯化钡溶液，使S042－的含量降低至0.0001 g/单位。自然过滤，除去硫酸钡沉淀。取滤液少量，用硫酸铵溶液试之，不得发生浑浊。如有钡盐存在，则加适量硫酸铵溶液使沉淀除去。滤液应澄清，然后在60～65℃减压浓缩，浓缩物至约达40u/ml浓度时出料，浓缩锅用蒸馏水洗3～4次，洗锅水和浓缩物合并，最后浓度达15～20 u/ml。出料后100℃保温30分钟，另加苯酚使其含量为0.5～1.0%溶解，加水稀释纛1000ml，冷藏沉淀。
6.等电点沉淀：将上述沉淀3天后的肝浓缩物用滤纸自然过滤，加盐酸调节pH值至3.8～4.0，冷藏沉淀3天，过滤，用氧氧化钠调节pH值至6.8，沉淀3天，过滤得澄清液。
7.配液、灭菌：取澄清滤液测定组织胺、蛋白质，合格后按每ml含20克鲜肝或50克鲜肝配制，用氢氧化钠或盐酸调整pH值5.0～7.0，用G4垂熔玻璃漏斗抽滤，灌封，100℃流通蒸汽灭菌30分钟，即得成品。
【作用与用途】本品为抗贫血药，用于治疗恶性贫血和其它巨细胞型贫血，但对一般缺铁性贫血无效。
【用法与用量】肌内注射常用量每日或隔日一次每次1～2 ml（2～5单位），或根据病情，医师酌情使用。
【贮藏】置避光、凉处保存。
【注解】
1.本品为澄明或带有轻微浑浊的黄褐色或红褐色的溶液。上述制法的操作原理，系完全依据柯氏研究的结果，并适当地省略了与制造注射液无关的步骤，所谓“柯氏成分G”（Cohn fraction G），系自食用动物肝脏提出的一种不含蛋白质的抗贫血成分，可溶于水、稀醇（60～80%,以70%最为适宜），不溶于乙醚及高浓度的乙醇（95%以上），故用上法制得的注射液含有肝脏中几乎全部的抗贫血成分（柯氏成分G）。
2.本品所用的原料，牛、羊、猪的肝脏均可用，惟一般均用牛肝，成本较低，国外药厂多选用小牛肝为原料，因其中维生素B12的含量最高。肝脏外表附有结缔组织、浆膜及脂肪等非肝组织部分，必须剥除，生产上应计算原料的收得率，例如1000斤鲜肝剥除非肝组织后共得950斤则：
收得率为 950/1000×100=95﹪
损耗率为100%－95%=5%
3.肝的抗贫血成分，具有耐热性，故可用水在高温浸出，加稀硫酸使溶液显酸性，使其中的蛋白质类杂质凝固，与残渣同时除去。加酸后须搅拌15分钟，始能加热，这样在酸性溶液中已有大部分蛋白质凝固，浸出液中由于大量蛋白质已除去，在真空浓缩时不易产生泡沫。酸的用量以调节pH达5.0～6.0之间为准。但在夏季或用不新鲜的牛肝抽提时，由于组织本身部分发生酸败，而微使酸度增高，故酸量可减少，但酸的用量不足，不但对蛋白质的凝固不完全，且对有效成分的抽出多少能受到影响。
4.本品用作注射，故必须将蛋白质类杂质除尽，以减少注射时的不良反应或疼痛。除去蛋白质的过程，除第一步用酸凝固外，再用70%醇反复沉淀之，因肝的抗贫血成分在70%醇中溶解，而在无水醇中不溶，故将浸出被浓缩后加浓醇适量，使混合液含醇量达70%左右，搅拌1小时后，静置24小时，蛋白质类杂质即析出沉淀，过滤除去之。加醇的量，应根据浓缩液所含的水分依下法计算：
设得浓缩液50斤，测得的水分为20%，则浓缩液中总水分为：50斤×20%=10斤（总水分）
如用95%醇将浓缩液含醇量调节至70%，则需用95%醇为：
0.95X =0.7
X＋10
X=7/0.25=28斤（95%醇用量）
用70%醇沉淀蛋白质的操作反复二至三次，再将各次用70%醇处理所得的倾出液与滤液合并后蒸发所得的浓缩物，取出少量，加醇试之无沉淀析出为止。为了使蛋白质能除尽，可取最后浓缩物行下列试验：
取软膏状浓缩物少许，加水溶解后，加磺水杨酸（sulfosalicylic Acid）溶液（30%）1 ml，振摇，应不发生混浊（检查蛋白质类）。
5.提纯的过程：除用70～75%醇沉淀蛋白质外，又将第二次浓缩物（即第一次浓缩物加醇达70～75%除去蛋白质沉淀后蒸浓所得物）加硫酸铵饱和，借盐析作用将有效成分析出，沉淀中的SO4=，可根据测定硫酸根含量的结果，计算加入氯化钡的用量，其计算法如下：
在工业生产中S04=含量的要求为每1单位不得超过0.0001 g。
例如投料时用1000斤肝，则总单位量应为：1000斤×50单位=50000单位
如检验结果S04=的含量每单位为0.01 g。
故每单位多余S04=为0.01－0.0001 g=0.0099 g
则S04=的总含量应为0.0099×50000=495 g根据反应：S04=＋BaCl2→BaS04+2Cl－
则96 g S04=需BaCl2·2H20为244.31 g
今495 g S04=需BaCl2·2H20为X
X=244.3/96 ×495 =1259.56g BaCl2·2H20
过量的氯化钡亦不得含有，故在沉淀S04=后，滤液再用硫酸铵溶液试之，不得发生浑浊，氯化钡亦可用醋酸钡代替之。
6.乙醇提取时，规定最后浓度为70～75%，盐析物醇冼后也是用70～75%乙醇溶解。乙醇浓度是指“g/g”。但目前许多厂在实际生产中是用酒精计测定的“ml/ml”浓度，两者有差异。例如，乙醇提取时，如果用酒精计在20℃测上清液为73%ml/ml，其实际浓度应比73%大，因为溶液中溶有硫酸等使比重增大的物质。粗略估计，其乙醇浓度可能约为75%ml/ml，约相当于68%g/g。两种浓度的差异，对有效成分的提取和溶解，可能有些差别，对蛋白质的量也会有影响，乙醇实际浓度较小时，会较多地溶出蛋白质和其它水溶性杂质。这些杂质有的最后仍能除去（如蛋白质），有的则不一定能除去。这个问题，值得进一步探讨。
7.本品的pH值应为5.0～7.0。所用抑菌剂除1%酚外，0.3～0.5%甲酚亦可用。肝注射液中可能含有的杂质是蛋白质、肝糖原，类脂体及葡萄糖等，此外尚含有毒物质组织胺，此种物质的产生，主要是由于肝脏中的蛋白质受自解酶的作用生成组胺酸，如组织继续腐败，则组胺酸产生脱羧作用而得组织胺：
故制造本品所用的原料，规定用新鲜的肝脏，或自动物摘下后经急冻贮藏者，以减低组织胺的含量，同时在精制过程中，加饱和硫酸铵沉淀有效成分时，可使水溶性物质如组织胺等留于母液中除去之。
8.为了节约乙醇的消耗量，国内有些生产单位采用所谓铁-钙沉淀法，其提取与精制工艺过程如下：
取剥除胆管，脂肪及结缔组织的净肝200 kg，绞碎后，加等量水于80～90℃温浸1小时，压滤，滤液减压浓缩至成1/4量，于搅拌下加10 kg硫酸亚铁及8 kg氧化钙，温度保持在70～80℃之间。离心分离残渣，并用少量水洗涤，合并滤洗液，加20%磷酸调整pH至5.3～5.5。于100℃加热15分钟，滤过，滤液取少量再加热至不生沉淀为止。残渣用水洗涤，合并滤洗液，再减压浓缩至成1/17量，过滤除去沉淀，并以水洗涤之，合并滤洗液，加20%氢氧化钠溶液调整pH至7.8～9.0，滤过，渣以水洗涤，合并滤洗液，加25%磷酸氢二钠溶液，加热使之反应完全。滤过，以水洗涤残渣，合并滤洗液，用10%枸橼酸调整pH至6.0～7.0，然后加热至100℃ 15分钟，放冷至70℃左右，加入酚0.5%作防腐剂。滤过，滤液总体积最后调至13.3升，即每1 ml相当于鲜肝15 g，并每1 ml中含维生素B12在1 μg以上，贮于冰箱中，化验合格后，以滤柱滤净，灌封于10 ml橡皮塞小瓶中，以100℃流通蒸汽灭菌16分钟即得。
据文献报导前法用醇提取—盐析法，由于硫酸铵盐析后的废液及无水醇洗涤液中仍含有少量维生素B12，以致所制成品中维生素B12的含量较低，而用铁-钙沉淀法则无此缺点，故维生素B12的含量较高。
加硫酸亚铁及氧化钙，为使生成硫酸钙与氢氧化铁沉淀，使蛋白质同时带下除去，但氧化钙必须过量，不使硫酸根留在溶液中，否则以后难以除去，由于氧化钙过量，溶液pH很高，易使有效成分破坏，故在减压浓缩前，用磷酸调pH 5.3～5.5，同时也除去钙离子，但磷酸的用量以不使pH低于5.3为准，否则，过多的磷酸根以后难以除去。
加20%NaOH使生成磷酸钠，尚有盐柝除去蛋白质的作用，为此目的有时尚加磷酸二氢钠。
如氧化钙质量不好，含有碳酸钙等杂质。虽加入过量，但pH不高，致使磷酸用量减少，溶液中ca＋＋不能除尽，则当成品灭菌后易生成沉淀。此法所制的成品中杂质含量较高，色泽亦不太理想，尚有待于改进。
9.本品的含量效价，目前均以含维生索B12的细菌检定法所得的量为标志，即每ml含维生素B12为1～2微克。
10.据文献报导，肝制剂中含有的维生素B12，常受光线，氧，容器中液面的空气以及还原剂等影响而失效。为了保存维生素B12的效价，可加入铁盐（如三氯化铁用量为0.25 mg/ml）作为稳定剂。
11.国外文献报导有“高纯度肝注射液”，其制法是：取肝脏l，965 g，绞碎（直径在5 mm左右），混悬于3，930 ml去离子水中，加95%硫酸酸化，混悬液搅拌，加热至45℃，并在此温度保持5小时，肝浆的pH值为4.5～4.6，冷却至5℃，过滤，滤液保存，残渣再加去离子水3000 ml操作同前。两次所得滤液合并（6，500 ml），调pH值至4.6，真空蒸发浓缩，温度不得过34～35℃。得浓缩液约1，900 g，含干燥物质为16%，加丙酮2，660 ml，搅拌，继续在18℃搅拌2小时，然后冷却至－8℃，经铺有硅藻土层的滤器滤清，滤液真空蒸发（<30℃），回收丙酮，残液再在－20℃冷冻，得干浸膏186g（9.48%），溶于水，含总氮10%，氨基氮4.1%，胞嘧啶核苷酸（Gytidylicacid）0.9%，尿甙酸（Uridylic acid）0.15%，鸟甙酸（（Guanylic acid）0.18%，叶酸1mg/g，泛酸（按泛酸钙计）400 mg/g，胆碱（按盐酸胆碱计）10 mg/g，维生素B12 1 mg/g，维生素PP 150 mg/g，维生素B120mg/g，组胺酸（盐基）8 mg/g，纯度比一般提取工艺所得者高50%。