两性霉素B

两性霉素BLiangxingmeisu BAmphotericin B

本品为[1R-（1R*，3S*，5R*，6R*，9R*，11R*，15S*，16R*，17R*，18S*，19E，21E，23E，25E，27E，29E，31E，33R*，35S*，36R*，37S*）]-33-[（3-氨基-3，6-二脱氧-β-D-吡喃甘露糖基）氧]-1，3，5，6，9，11，17，37-八羟基-15，16，18-三甲基-13-氧代-14，39-二氧双环[33.3.1]三十九烷-19，21，23，25，27，29，31-七烯-36-羧酸。按干燥品计算，每1mg的效价不得少于850两性霉素B单位。
【性状】本品为黄色至橙黄色粉末，无臭或几乎无臭；有引湿性，在日光下易破坏失效。
本品在二甲基亚砜中溶解，在N，N-二甲基甲酰胺中微溶，在甲醇中极微溶解，在水、无水乙醇或乙醚中不溶。
【鉴别】（1）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
（2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集176 图）一致。
【检查】酸度 取本品3%的混悬液，依法测定（通则 0631），pH值应为4.0～6.0。
有关物质 临用新制。取本品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.8mg的溶液，精密量取适量，用稀释剂[N，N-二甲基甲酰胺-水（1：1）]定量稀释制成每1ml中约含80μg的溶液，作为供试品溶液；另取两性霉素B对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.8mg的溶液，精密量取适量，用上述稀释剂定量稀释制成每1ml中约含0.8μg的溶液，作为383nm检测用对照品溶液；精密量取对照品溶液适量，用上述稀释剂定量稀释制成每1ml中约含0.08μg的溶液，作为灵敏度溶液。照高效液相色谱法（通则 0512）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱）；流动相A为乙腈-磷酸溶液（pH 1.00士0.05）（300：700），流动相B为乙腈-磷酸溶液（pH 1.00±0.05）（500：500），按下表进行线性梯度洗脱，必要时调整流动相的比例使两性霉素B的保留时间在25～30分钟之间；流速为每分钟0.8ml；柱温为25℃；检测波长为303nm和383nm。取两性霉素B约8mg，置50ml棕色量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺5ml使溶解，用甲醇稀释至刻度，加盐酸0.1ml，摇匀，放置1小时，取5ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，取100μl注入液相色谱仪，383nm检测，记录色谱图，杂质C峰与杂质B峰之间的分离度应符合要求。取灵敏度溶液100μl注入液相色谱仪，383nm检测，记录色谱图，主成分色谱峰高的信噪比应大于10。精密量取供试品溶液和对照品溶液各100μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。303mn检测得到的供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质A（相对保留时间约为0.75）峰面积不得大于两性霉素B峰面积的0.5倍（2.0%）（供注射用），杂质A峰面积不得大于两性霉素B峰面积的1.25倍（5.0%）（供非注射用），其他单个杂质峰面积不得大于两性霉素B峰面积的0.25倍（1.0%）；供试品溶液色谱图中小于两性霉素B峰面积的0.025倍的峰忽略不计（0.1%）；383nm检测得到的供试品溶液色谱图中如有杂质峰，按外标法以对照品溶液主峰面积计算，杂质B和杂质D之和不得过4.0%，其他单个杂质峰不得过2.0%，供试品溶液色谱图中小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计。303nm处和383nm处检测的杂质总量不得过15.0%。
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时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%）
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0
100
0

50
20
80

51
100
0

60
100
0
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干燥失重 取本品，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥至恒重，减失重量不得过5.0%（通则 0831）。
【含量测定】照高效液相色谱法（通则 0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸溶液（pH 1.00士0.05）（370：630）为流动相；流速为每分钟0.8ml；柱温为25℃；检测波长为383nm。取两性霉素B对照品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，两性霉素B峰与相邻杂质峰间的分离度应符合要求。
测定法 临用新制。取本品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.8mg的溶液，精密量取1ml，置10ml棕色量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺-水（1：1）稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取两性霉素B对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.8mg的溶液，精密量取1ml，置10ml棕色量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺-水（1：1）稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。每1mg的C₄₇H₇₃N0₁₇相当于1049两性霉素B单位。
【类别】抗真菌药。
【贮藏】遮光，严封，冷藏。
【制剂】注射用两性霉素B
附：
1.两性霉素B有关物质分析典型色谱图

填料品牌：XBridge shield RP18、XAqua C18等，可分离杂质B和杂质D。

填料品牌：CAPCELL PAK C18 MG Ⅱ、Ultimate LP-Cl8、Inspire C18等，杂质B和杂质D同时洗脱。
2.杂质结构