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尿激酶
Niaojimei
Urokinase

本品系从新鲜人尿中提取的一种能激活纤维蛋白溶酶原的酶。它是由高分子量尿激酶(MW54000)和低分子量尿激酶(MW33000)组成的混合物,高分子量尿激酶含量不得少于90%,每1mg蛋白中尿激酶活力不得少于12万单位。
【制法要求】 本品应从健康人群的尿中提取,生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》要求。本品在生产过程中需经60℃加热10小时,以使病毒灭活。
【性状】 本品为白色或类白色粉末。
【鉴别】 取效价测定项下的供试品溶液,用巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)稀释制成每1ml中含20单位的溶液,取1ml,加牛纤维蛋白原溶液0.3ml,再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液0.2ml与牛凝血酶溶液0.2ml,迅速摇匀,立即置37℃±0.5℃恒温水浴中保温,立即计时。应在30~45秒内凝结,且凝块在15分钟内重新溶解。以0.9%氯化钠溶液作空白,同法操作,凝块在2小时内不溶(上述试剂的配制同效价测定)。
【检查】 溶液的澄清度与颜色 取本品,加0.9%氯化钠溶液溶解并稀释制成每1ml中含3000单位的溶液,依法检查(通则0901第一法与通则0902第一法),应澄清无色。
干燥失重 取本品,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥至恒重,减失重量不得大于5.0%(通则0831)。
分子组分比 取本品,加水溶解并稀释制成每1ml中含2mg的溶液后,加入等体积的缓冲液[取浓缩胶缓冲液(F液)2.5ml、20%十二烷基硫酸钠溶液2.5ml、0.1%溴酚蓝溶液1.0ml与87%甘油溶液3.5ml,加水至10ml],置水浴中3分钟,放冷,作为供试品溶液,取10μl,加至样品孔,照电泳法(通则0541第五法 考马斯亮蓝法染色)测定,按下式计算高分子量尿激酶相对含量(%)。

乙肝表面抗原 取本品,加0.9%氯化钠溶液溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液,按试剂盒说明书项下测定,应为阴性。
异常毒性 取本品,加氯化钠注射液溶解并稀释制成每1ml中含5000单位的溶液,依法检查(通则1141),应符合规定。
细菌内毒素 取本品,依法检查(通则1143),每1万单位尿激酶中含内毒素的量应小于1.0EU。
凝血质样活性物质 血浆的制备 取新鲜兔血,加3.8%枸橼酸钠溶液(每9ml兔血加3.8%枸橼酸钠溶液1ml),混匀,在2~8℃条件下,以每分钟5000转离心20分钟。取上清液在-20℃速冻保存备用,用前在25℃融化。
测定法 取本品,加巴比妥缓冲液(pH7.4)溶解并稀释制成每1ml中各含5000单位、2500单位、1250单位、625单位与312单位的供试品溶液。若供试品中含乙二胺四醋酸盐或磷酸盐,必须先经巴比妥缓冲液(pH7.4)在2℃透析除去,再配成上述浓度的溶液。
取小试管(12mm×75mm)7支,在第1管和第7管各加巴比妥缓冲液(pH7.4)0.1ml作空白对照,其余5管分别加入上述倍比稀释的供试品溶液各0.1ml,再依次加入6-氨基己酸溶液[取6-氨基己酸1.97g,加巴比妥缓冲液(pH7.4)使溶解,并稀释至50ml]与血浆各0.1ml,轻轻摇匀,在25℃水浴中,静置3分钟,加入已预温至25℃的氯化钙溶液(取氯化钙1.84g,加水使溶解并稀释至500ml)0.1ml,混匀,置水浴中,立即计时。注意观察血浆凝固,终点判断为轻轻倾斜试管置水平状,溶液呈斜面但不流动,记录凝固时间(秒)。每个浓度测3次,求平均值(3次测定中最大值与最小值的差不得超过平均值的10%)。以供试品溶液浓度的对数为纵坐标,复钙缩短时间(空白管的凝固时间减去供试品管的凝固时间)为横坐标绘图。连接不同稀释度的供试品各点,应成一直线,延伸直线与纵坐标轴的交点为供试品浓度,即凝血质样活性为零值时的供试品酶活力,按每1ml供试品溶液的单位表示,每1ml应不得少于150单位。
【效价测定】 酶活力 (1)试剂 牛纤维蛋白原溶液 取牛纤维蛋白原,加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)溶解并稀释制成每1ml中含6.67mg可凝结蛋白的溶液。
牛凝血酶溶液 取牛凝血酶,加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)溶解并稀释制成每1ml中含6.0单位的溶液。
牛纤维蛋白溶酶原溶液 取牛纤维蛋白溶酶原,加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)溶解并稀释制成每1ml中含1~1.4酪蛋白单位的溶液(如溶液浑浊,离心,取上清液备用)。
混合溶液 临用前取等体积的牛凝血酶溶液和牛纤维蛋白溶酶原溶液,混匀。
(2)标准品溶液的制备 取尿激酶标准品,加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)溶解并定量稀释制成每1ml中含60单位的溶液。
(3)供试品溶液的制备 取本品适量,精密称定,加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)溶解,并定量稀释制成与标准品溶液相同浓度的溶液,摇匀。
(4)测定法 取试管4支,各加牛纤维蛋白原溶液0.3ml,置37℃±0.5℃水浴中,分别加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)0.9ml、0.8ml、0.7ml、0.6ml,依次加标准品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml,再分别加混合溶液0.4ml,立即摇匀,分别计时。反应系统应在30~40秒内凝结,当凝块内小气泡上升到反应系统体积一半时作为反应终点,立即计时。每个浓度测3次,求平均值(3次测定中最大值与最小值的差不得超过平均值的10%)。以尿激酶浓度的对数为横坐标,以反应终点时间的对数为纵坐标,进行线性回归。供试品按上法测定,用线性回归方程求得供试品溶液浓度,计算每1mg供试品的效价(单位)。
蛋白质含量 取本品约10mg,精密称定,照蛋白质含量测定法(通则0731第一法)测定,即得。
比活 每1mg蛋白中含尿激酶活力单位数。
【类别】 溶栓药。
【贮藏】 遮光,密封,在10℃以下保存。
【制剂】 注射用尿激酶
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