3118 己二酰肼含量测定法

3118 己二酰肼含量测定法
本法系依据在四硼酸钠存在的条件下，己二酰肼（ADH）中的氨基基团能与三硝基苯磺酸（TNBS）发生显色反应，采用紫外-可见分光光度法测定b型流感嗜血杆菌多糖衍生物中己二酰肼的含量。
试剂 （1）己二酰肼对照品贮备液（1mg/ml） 精密称定已二酰肼0.100g，加水定容至100ml，于-20℃保存。
（2）己二酰肼对照品工作液（20μg/ml）精密量取ADH对照品贮备液0.2ml，加水定容至10ml。
（3）5%四硼酸钠溶液 称取四硼酸钠（Na₂B₄O₇? 10H₂O）47.35g，加水定容至500ml，于室温保存。
（4）3%TNBS溶液 量取TNBS 5ml，加水定容至50ml，于-20℃保存。
测定法 量取5%四硼酸钠溶液1.0ml，加水1ml，混匀，再加入3%TNBS溶液0.3ml，混匀，于室温放置15分钟，在波长500nm处测定吸光度，作为空白对照。
先将供试品用水稀释至己二酰肼浓度不高于20μg/ml， 作为供试品溶液，然后取1.0ml，加入5%四硼酸钠溶液1.0ml，自“加入3% TNBS溶液0.3ml”起同法操作。
分别取己二酰肼对照品工作液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml于试管中，每管依次加水0.8ml、0.6ml、0.4ml、0.2ml、0ml，加入5%四硼酸钠溶液1.0ml，自“加入3% TNBS溶液0.3ml”起同法操作。
结果计算 以己二酰肼对照品工作液的浓度对其相应的吸光度作直线回归，求得直线回归方程，将供试品溶液的吸光度代入直线回归方程，求出供试品溶液的己二酰肼含量，根据稀释倍数计算供试品的己二酰肼含量。