3121 人血白蛋白多聚体测定法

3121 人血白蛋白多聚体测定法
本法系用分子排阻色谱法测定人血白蛋白多聚体含量。
照分子排阻色谱法（通则0514）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱（SEC，排阻极限300kD，粒度10μm），柱直径7.5mm，长60cm；以含1%异丙醇的pH7.0、0.2mol/L 磷酸盐缓冲液[量取0.5mol/L磷酸二氢钠200ml、0.5mol/L磷酸氢二钠420ml、异丙醇15.5ml及水914.5ml，混匀]为流动相；检测波长为280nm；流速为每分钟0.6ml。取每1ml含蛋白质12mg的人血白蛋白溶液20μl，注入色谱柱，记录色谱图，人血白蛋白单体峰与二聚体峰间的分离度应大于1.5，拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95～1.40。

测定法 取供试品适量，用流动相稀释成每1ml约含蛋白质12mg的溶液，取20μl，注入色谱柱，记录色谱图60分钟。
按面积归一法计算，色谱图中未保留（全排阻）峰的含量（%）除以2，即为人血白蛋白多聚体含量。