胰激肽原酶

胰激肽原酶YijitaiyuanmeiPancreatic Kininogenase
本品系自猪胰中提取的蛋白酶。每1mg蛋白含胰激肽原酶的活力不得少于300单位（供口服用）或600单位（供注射用）。
【制法要求】本品应从检疫合格的猪胰中提取，生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。供注射用的本品在生产过程中应采用适宜的病毒灭活工艺。
【性状】本品为白色或类白色粉末；无臭。
本品在水中易溶，在乙醇或乙醚中几乎不溶。
【鉴别】（1）取已测得效价的本品适量，精密称定，加纯度项下的磷酸盐缓冲液溶解并定量稀释制成每1ml中含10单位的溶液。精密量取4ml，置10ml量瓶中，用上述缓冲液稀释至刻度，作为供试品溶液。
取效价测定项下的底物溶液2.9ml，在30℃±0.5℃预热5分钟，置1cm比色池中，精密加入供试品溶液0.1ml，混匀，立即计时，使比色池内的温度保持在30℃±0.5℃，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在253nm的波长处测定，以纯度项下的磷酸盐缓冲液0.1ml代替供试品溶液，同法操作，作为空白对照。准确读取4分钟时的吸光度（A4）和6分钟时的吸光度（A6）。求得A值[（A6-A4）/2]，按下式计算，R值（水解速率）应为0.12～0.17。

式中a为供试品溶液每1ml中的毫克数；
b为供试品每1mg的效价单位数。
（2）在纯度项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
【检查】酸碱度 取本品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中含300单位的溶液，依法测定（通则0631），pH值应为5.5～7.5。
溶液的澄清度 取本品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中含2mg的溶液，依法检查（通则0902第一法），溶液应澄清。（供注射用）
脂肪 取本品1.0g，置具塞锥形瓶中，加乙醚20ml，密塞，时时旋动，放置约30分钟后，将乙醚液倾至用乙醚润湿的滤纸上，滤过，再用乙醚10ml洗涤残渣，合并滤液及洗液至已恒重的蒸发皿中，除去乙醚，在105℃干燥2小时，精密称定，遗留脂肪不得过5mg。
相关蛋白酶 供试品溶液的制备 取本品适量，加纯度项下的磷酸盐缓冲液（pH 7.0）溶解并稀释制成每1ml中含1单位的溶液。
测定法 精密量取供试品溶液4ml置试管中，在35℃±0.5℃水浴中保温5分钟，精密加入已预热至35℃±0.5℃的酪蛋白溶液（取酪蛋白0.6g，加0.05mol/L磷酸氢二钠溶液80ml，65℃加热溶解，放冷，调节pH值至8.0，用水稀释至100ml，临用前配制）5ml，混匀，于35℃±0.5℃水浴中准确反应20分钟，再精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，混匀，滤过，取续滤液作为测定溶液；另精密量取供试品溶液1ml，置试管中，精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，混匀，于35℃±0.5℃水浴中准确反应20分钟，再精密加入上述酪蛋白溶液5ml，混匀，滤过，取续滤液作为空白溶液，在2小时内照紫外-可见分光光度法（通则0401），在280nm的波长处测定吸光度，不得过0.2。
纯度 取本品适量，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含200单位的溶液，作为供试品溶液；另取胰激肽原酶对照品（纯度应大于95%）适量，同法制成每1ml中约含200单位的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（通则0512） 试验，用疏水性凝胶为填充剂（TSKgel Phenyl-5PW， 7.5mm×75mm，10μm或其他适宜的色谱柱），以含1.7mol/L硫酸铵的磷酸盐缓冲液（pH 7.0）（取磷酸氢二钠10.9g，磷酸二氢钠2.3g，加水溶解并稀释至1000ml，用50%磷酸溶液调节pH值至7.0）为流动相A，以上述磷酸盐缓冲液（pH 7.0）为流动相B；柱温为25℃ ；流速为每分钟0.5ml；检测波长为280nm。按下表进行梯度洗脱。理论板数按胰激肽原酶峰计算不低于1500，胰激肽原酶主峰与相邻杂质峰之间的分离度不得低于0.8。取流动相A、供试品溶液及对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。将供试品溶液和对照品溶液的色谱图扣除流动相A色谱图（作为空白基线），进行基线校正。在供试品溶液色谱图中，量取空白基线拐点（约16分钟）后所有色谱峰面积，按面积归一化法计算，与对照品溶液主峰保留时间一致的主峰面积不得低于75% （供口服用）或90%（供注射用）。
时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%）
0
100
0

10
100
0

20
0
100
35
0
100
36
100
0

56
100
0

干燥失重 取本品0.5g，以五氧化二磷为干燥剂，在 60℃减压干燥4小时，减失重量不得过5.0%（通则0831）。
炽灼残渣 取本品0.5g，依法检查（通则0841），遗留残渣不得过3.0%。
细菌内毒素 取本品，依法检查（通则1143），每1单位胰激肽原酶中含内毒素的量应小于2.5EU。（供注射用）
【效价测定】酶活力 标准品溶液的制备 取胰激肽原酶标准品，按标示单位，加纯度项下的磷酸盐缓冲液（pH7.0） 适量使溶解并定量稀释制成每1ml中含10单位的溶液。
供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定，加上述磷酸盐缓冲液（pH7.0）适量使溶解并定量稀释制成每1ml中约含10单位的溶液。
底物溶液的制备 取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐17.7mg，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液（称取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml溶解，用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0，用水稀释至1000ml）适量使溶解并稀释至100ml，4℃保存。
测定法 取25℃±0.5℃水浴中预热的底物溶液2.5ml，置1cm比色池中，分别精密加入供试品溶液或标准品溶液0.1ml，混匀，立即计时，使比色池内的温度保持在25℃±0.5℃，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在253nm波长处，以底物溶液为空白，准确读取1分钟时的吸光度A0和3分钟时的吸光度A，标准品溶液和供试品溶液需平行测定3次，分别求得标准品溶液和供试品溶液的⊿A值（⊿A=A-A0）的平均值，代入下式计算。


n为稀释倍数；
W为供试品量，mg。
蛋白含量 取本品约10mg，精密称定，照蛋白质含量测定法（通则0731第一法）测定，即得。
比活 由测得的酶活力和蛋白含量计算每1mg蛋白中含胰激肽原酶的单位数，即得。
【类别】血管舒张药。
【贮藏】遮光，密封，在阴凉干燥处保存。
【制剂】胰激肽原酶肠溶片