肝素注射液
Injectio Heparini（Injectio Heparini Natrici）
本品为肝素溶于氯化钠注射液的灭菌溶液。含肝素的效价应相当于标示量。
常用制品：（1）2 ml内含1000单位。（2）2 ml内含5000单位。（3）2 ml内含2，500单位或1 ml内含12，500单位。
【制法】取肝素溶于氯化钠注射液中，调节pH至7.0～8，5，用无菌操作手续过滤除菌后，灌封于灭菌的容器中，即得。
【作用与用途】
肝素在体内外均能延长凝血时间，其抗凝血作用极为复杂，对凝血过程的各个环节均有影响：
①抑制凝血酶原变成凝血酶，此作用部分由于其抑制凝血致活酶的活力；
②抑制凝血酶，使之不能发挥促进纤维蛋白原变为纤维蛋白的作用；
③阻止血小板的凝集和破坏。一般认为肝素的抗凝血作用与其带阴电荷有关，精蛋白因能中和其阴电荷，故能抑制其抗血凝作用。常用于输血和防治各种血栓形成或栓塞；又能影响血脂的新陈代谢，用于消除血脂，治疗动脉硬化等症。本品口服无效，必须注射。
【用法与用量】
①深部肌注每次10000～12，500单位，每8～12小时一次。
②静脉滴注用5000单位加入5～10%葡萄糖溶液或生理盐水100 ml中滴注，速度每分钟20～30滴。
【注意】
①用药过多可导致自发性出血，故每次注射前应测定凝血时间。
②如注射后引起严重出血，可静注硫酸精蛋白进行急救，1 mg硫酸精蛋白可中和130单位的肝素。
③禁用于出血性患者和伴有凝血迟缓的各种病人。
④孕妇及妇女产后慎用；明显肝肾功能不良及血压过高的患者慎用。
⑤肌内注射刺激性较大，应选用较细针头（4号～5号）作深部肌注，并加2%盐酸普鲁卡因。
【注解】
1.肝素（Heparinum）是一种粘多糖的硫酸酯。在体内与蛋白质结合成复合物形式而存在：例如在细胞中，它与类脂蛋自相结合。在试管中肝素也可与某种蛋白质结合。这种复合物；即无抗凝血活性。例如纯品肝素每mg可与1.9～2.3 mg鱼精蛋白全部结合。故后者可对抗肝素的凝血作用。
肝素的化学结构式为：
肝素为无嗅或几乎无嗅的白色或灰白色无定形粉末，具引湿性。其分子量可能在15000～20000范围。
肝素及其钠盐易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶媒。游离酸在乙醚中有一定的溶解度。肝素具有两性化合物的特点，故可与Na+、Ba++、Ca++成盐，也可与HCl、苦味酸成盐，此等盐类均可制成结晶状态。
肝素的化学性质，对提取过程意义极大，兹分别叙述如下：
①水解反应：肝素糖甙键不易被酸水解，O-硫酸基对酸水解相当稳定（尤其温度低时），但N-硫酸基对酸水解敏感。困此，肝素在温热的稀酸内会迅速失活。温度越高，pH值越低，失活越快。用0.1 N HCl在70℃加热1分钟后约失活70%的抗凝血效价。粗制肝素的水溶液在pH2.5时.经80℃ 2小时加热将损失效价达一半，在温稀醋酸中，也能很快失效。
肝素在碱性条件下，N-硫酸基相当稳定，纯度愈高，稳定性愈大。精制肝素钠在10 N碱溶液及50%硫酸铵溶液中，虽加热至80℃ 1小时，亦不引起活力降低，粗制肝素在碱性溶液中稳定性较差，但用稀碱溶液浸出亦无损失。浓碱溶液，特别是温度升高时能引起破坏。
②氧化反应：氧化剂存在时，肝素可被降解成酸性产物。由于氧化剂能与肝素作用。有些使用氧化剂的脱色工艺，尽管操作时严加控制，但此步收率也仅能达到80%。然而，一些脱色工艺以及含肝素的水溶液的贮存时，使用还原剂，则几乎不影响肝素的效价。
③中和反应：肝素呈强酸性，其聚阴离子能与各种阳离子反应生成盐，如金属离子及各种有机阳离子——有机碱、生物碱、碱性染料、阳离子型表面活性物质（长链季铵盐）、聚阳离子、蛋白质等。
④酶的作用：一般组织中的酶很少能破坏肝素，特别在提取过程中用胰酶消化蛋白质类杂质时，对肝素不起变化，第一步的自溶过程反而能增加肝素的效价。
2.肝素的生物标准：以每mg肝素制剂（60℃，2㎜Hg柱真空干燥3小时）所相当的单位数来表示。l单位（u）为24小时内在冷处阻止1 ml猫血凝结所需的最低肝素量。
3.肝素的提取法：目前发表的文献极多，并且有了很大的进展。但其主要步骤，部分粗制与精制二阶段。过去，粗制阶段又分自溶、提取及分离等过程。因为组织中的肝素与其它酸性粘多糖一起，并与蛋白质结合着，以提取时，往往包括肝素蛋白质复合物的提取，该复合物的解离，最后将得到的粗制品进行精制。兹将我国以牛肺和肠粘膜为原料提取肝素的方法分述如下：
I.牛肺提取法
①原料处理：取冰冻牛肺解冻后，选取2.0 kg以上大肺剪去主气管和较大气管，然后剪成长条，用绞碎机绞磨成肉麋状，称取重量。
②自溶：称取绞碎牛肺300 kg，置1000 l搪玻璃锅中，加入自来水150 kg，搅拌均匀，加温至45℃，加入甲苯6 l，在39～41℃保温自溶20小时，每半小时搅拌一次，使上下温度均匀。
③提取：称取硫酸铵27 kg，加水90 kg，溶解后，加入自溶液中，搅拌均匀，加入40%氧氧化钠；调节pH值至8.8～9：2，水浴加热，使温度在半小时内升至50℃，保温搅拌l小时，然后继续加热，在3小时内均匀升温至90℃，保温20分钟，过滤完毕，冷却至50℃以下，将提取构置布袋中过滤，滤渣压榨，滤液并入滤液中，将压榨后残渣，置搪瓷锅中进行第二次提取，称取自来水100 kg，加入硫酸铵（固体）6 kg，溶解后在不断搅拌下加入40%氢氧化钠，调节pH值至8.5～9.0，同时均匀加热至80℃，保温20分钟，冷却过滤，合并二次提取液；弃去残渣，每kg净肺应得提取液1.5～1.6kg。
④沉淀：将提取液冷却至40℃上下，在充分搅拌下，用20%硫酸调节pH值至2.5，放置过夜，使肝素-蛋白络合物沉淀，虹吸去上请液，沉淀用绸布过滤，所得沉淀用5倍最乙醇搅拌浸袍1小时过滤，滤渣再用5倍量乙醇搅拌洗涤二次，除去脂肪，滤干即得粗制品，每kg牛肺得湿品12～14 g。
⑤解离：将粗制品分次置球磨机中，加入5倍量自来水和少量40%氢氧化钠，调pH值至9～10，研磨半小时，使成浆状，续加自来水，使全部用水量为粗制品的20倍，在不断搅拌下滴加40%氢氧化钠，调溶液最终pH值为10，继续搅拌半小时使溶解；按溶液体积加入NaCl使浓度达10%，用20%硫酸调pH值至2.5，静置过夜，虹吸分出上层清液，沉淀用滤纸抽滤，所得滤渣。用2倍量pH值2.5的10%NaCl洗涤一次，继
续过滤，弃去滤渣；将滤液和虹吸液合并，过滤，得黄色透明肝素溶液。
⑥提纯：滤液加入等量自来水，用2 N氯氧化钠调pH值至7.0。另按溶液总体积计算每公升称取溴化十五烷基吡啶25 g，加水适量，微温使溶解成5%溶液，置分液漏斗中用乙醚振摇3～4次，每次乙醚用量为溴化十五烷基吡啶溶液量的1/5,直至醚层完全无色为止，分出水层；将红色澄清水层在搅拌下滴加入肝素溶液中，搅拌均匀后静置冰箱中过夜（取上层清液少许，置试管中加入数滴硫氰化钾试液，应有白色沉淀生成，
则证明沉淀已完全，否则应继续加入少量溴化十五烷基吡啶溶液），用虹吸法分出上层清液，用管式离心机收集下层沉淀，沉淀用蒸馏水洗涤2～3次，直至洗液对1M硫氰化钾溶液无反应为止，将沉淀物用2M氯化钠溶液溶解，并用0.1N氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，将溶液置管式离心机中，每分钟2，500转，离心10分钟分去油状物质，离心液用布氏漏斗滤清，加入0.8倍量丙酮，放置冰箱中过夜，使沉淀，去丙酮，离
心分离得沉淀，用丙酮洗2～3次，置五氧化二磷真空干燥器中在室温干燥，即得灰白色粉末肝素精制品（收得率：0.11 g/kg按净肺重量计算；效价90～100u/mg）。
⑦脱色：将精制品溶于15倍量蒸馏水中，并滴加l N氢氧化钠，使pH值达8.5～9.0，滤去不溶物，按溶液体积以2%、0.5%，0.5和1%，分四次加入30%双氧水，并不时用1 N氢氧化钠调节pH值至8.5～9.0，20小时脱色完毕，用滤纸滤去氧化物，得澄清肝素脱色液。
⑧除热原，干燥：将脱色液滴加5 N氢氧化钠，使pH值达12～13，在室温放置24小时，按无热原操作法将滤液用纸浆过滤，清液用5 N盐酸调节pH值至7.0左右，再按溶液体积加入1%经250℃烘1小时之无热原氯化钠。在搅拌下加入0.8倍量丙酮（化学纯），放置冰箱4～5小时，然后按无热原操作法用离心机收集沉淀，并用50%丙酮洗涤二次，无水丙酮洗涤二次，乙醚洗涤一次，在五氧化二磷上室温真空干燥即得白色粉末成品（收得率：9000 u/kg，按净肺重量计算，效价在130～140 u/mg）。
Ⅱ、猪肠粘膜离子交换树脂提取法：
（一）粗制：
（1）取新鲜肠粘膜投入反应锅中，加入3%氯化钠，用碱液调pH值至9.0，逐步升温至50～55℃，保温2小时。
（2）继续升温至95℃，维持10分钟，随即冷却。将提取液通过30目二层纱窗布，待温度冷至50℃以下，即加入714型Cl－型阴离子交换树脂，新树脂用量为2%（树脂处理见后），搅拌8小时后静置过夜。
（3）次日，虹吸除去上层液，收集树脂，用水冲洗至上清液澄明，滤干，用2倍量1.4 M氯化钠搅拌2小时，滤干，树脂再用l倍量1.4M氯化钠搅拌2小时，滤干。
（4）树脂继用3 M氯化钠（用量为树脂的2倍）搅拌脱吸附8小时，滤干；再用1倍时3 M氯化钠搅拌脱吸2小时，滤干，合并滤液，加入等量95%乙醇，沉淀过夜。
（5）虹吸除去上清液，收集沉淀，丙酮脱水干燥，得粗制品。
（二）精制：
将粗制品溶于15倍量1%氯化钠中，加8 N盐酸调节pH至1～1.5，过滤至清，随即用5 N氢氧化钠调节pH至11.0，加入3%双氧水（浓度为30%），25℃处放置。开始需不断校正pH值至11.0，第二天再加入1%双氧水，校正pH至11.0，共48小时，过滤，用6 N盐酸调节pH至6.5，加入等量的95%乙醇沉淀，过夜，次日虹吸除去上清液。沉淀用丙酮脱水，干燥，即得肝素钠精制品。
（三）离子交换树脂处理：
取新的714型强碱性阴离子交换树脂，加入2倍量2 N氢氧化钠溶液，搅拌3小时，水洗至中性，再用2倍量2 N盐酸搅拌3小时，水洗至中性，滤干备用。
再生：经3 M氯化钠脱吸的树脂，用2倍量24%氯化钠浸泡过夜，滤干备用（树脂再生法尚在进一步摸索）。
（四）讨论：
上海生物化学制药厂曾先后采用不同的季铵盐[如溴化十五烷基吡啶（PPB）、十六烷基三甲基溴化胺（CTAB）]作沉淀剂制取肝素，现用离子变换树脂法，远较季铵盐法优越：①节省大量辅料，如进口的CTAB，节约意义更大。②操作简便。③工艺稳定，收率较高，估计收得率比CTAB法提高50%以上。据该广现用肠粘膜原料的浓度计，可由15000 u/kg肠粘膜提高到22000～30000 u/kg肠粘膜。④肝素钠注射液中加入0.01～0.5%g/ml枸橼酸钠作缓冲剂及适量枸橼酸（约0.03%）调节pH至4.5～5.5，能增加溶液的稳定性。⑤本品注射后，由于单纯溶液呈现作用较速，但消失亦很快，故有人建设加入明胶以延缓其作用，长效肝素注射液可按下列处方配制：
肝素0.2 g
白明胶（细粉）0.18 g
葡萄糖0.08 g
将上列药物按无菌操作法混合后，封装于粉末安瓿中，临用前加注射用水溶解后，供肌内注射。由于白明胶的存在，须用热水溶解，并须选用较粗的针头给患者注射。有时在注射过程中由于温度下降，常易堵塞针头，造成使用上的不方便，为了克服以上缺点，故有改用羧甲基纤雏素钠，在100mg/ml的肝素溶液中加入羧甲基纤维素钠1.25%，具有长效作用。