川贝母

Chuanbeimu

FRITILLARIAE CIRRHOSAE BULBUS

    本品为百合科植物川贝母Fritillaria cirrhosa D.Don、暗紫贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia、甘肃贝母Fritillaria prze walskii Maxim.梭砂贝母Fritillaria delavayi Franch.、太白贝母Fritillaria taipaiensis P.Y.Li或瓦布贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C Hsia var.wabuensis（S.Y.Tang et S.C.Yue）Z.D.Liu，S.Wang et S.C.Chen的干燥鳞莲。按性状不同分别习称“松贝”“青贝”“炉贝”和“栽培品”。夏、秋二季或积雪融化后采挖，除去须根、粗皮及泥沙，晒干或低温干燥。

【性状】松贝  呈类圆锥形或近球形，高0.3-0.8cm，直径0.3-0.9cm。表面类白色。外层鳞叶2瓣，大小悬殊，大瓣紧抱小瓣，未抱部分呈新月形，习称“怀中抱月”；顶部闭合，内有类圆柱形、顶端稍尖的心芽和小鳞叶l-2枚；先端钝圆或稍尖，底部平，微凹入，中心有1灰褐色鳞茎盘，偶有残存须根。质硬而脆，断面白色，富粉性。气微，味微苦。

青贝  呈类扁球形，高0.4-1.4cm，直径0.4-1.6cm。外层鳞叶2瓣，大小相近，相对抱合，顶部开裂，内有心芽和小鳞叶2-3枚及细圆柱形的残茎。

炉贝  呈长圆锥形，高0.7-2，5cm，直径0.5-2.5cm。表面类白色或浅棕黄色，有的具棕色斑点。外层鳞叶2瓣，大小相近，顶部开裂而略尖，基部稍尖或较钝。

栽培品  呈类扁球形或短圆柱形，高0.5-2cm，直径l-2.5cm。表面类白色或浅棕黄色，稍粗糙，有的具浅黄色斑点。外层鳞叶2瓣，大小相近，顶部多开裂而较平。

【鉴别】（1）本品粉末类白色或浅黄色。

松贝，青贝及栽培品  淀粉粒甚多，广卵形、长圆形或不规则圆形，有的边缘不平整或略作分枝状，直径5-64μm，脐点短缝状、点状、人字状或马蹄状，层纹隐约可见。表皮细胞类长方形，垂周壁微波状弯曲，偶见不定式气孔，圆形或扁圆形。螺纹导管直径5-26μm。

炉贝  淀粉粒广卵形、贝壳形、肾形或椭圆形，直径约至60μm，脐点人字状、星状或点状，层纹明显。螺纹导管和网纹导管直径可达64μm。

取本品粉末l0g，加浓氨试液l0ml，密塞，浸泡l小时，加二氯甲烷40ml，超声处

理l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取贝母辛对照品、贝母素乙对照品，分别加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录0502）试验，吸取供试品溶液1-6μl、对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液-水（18：2：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以稀碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙 醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（3）聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性方法。

模板DNA提取取本品0.1g，依次用75%乙醇lml、灭菌超纯水1ml清洗，吸干表面水分，置乳钵中研磨成极细粉。取20mg，置1.5ml离心管中，用新型广谱植物基因组DNA快速提取试剂盒提取DNA[加入缓冲液APl 400μl和RNA酶溶液（10mg/ml）4μl，涡漩振荡，65℃：水浴加热10分钟，加入缓冲液AP2 130μl，充分混匀，冰浴冷却5分钟，离心（转速为每分钟l4 000转）l0分钟；吸取上清液转移人另一离心管中，加入1.5倍体积的缓冲液AP3/E，混匀，加到吸附柱上，离心（转速为每分钟13 000转）1分钟，弃去过滤液，加入漂洗液700μl，离心（转速为每分钟l2 000转）30秒，弃去过滤液；再加入漂洗液500u1.离心（转速为每分钟12 000转）30秒，弃去过滤液；再离心（转速为每分钟13 000转）2分钟，取出吸附柱，放人另一离心管中，加入50μl洗脱缓冲液，室温放置3-5分钟，离心（转速为每分钟12 000转）1分钟，将洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2分钟，离心（转速为每分钟12 000转）1分钟]，取洗脱液，作为供试品溶液，置4℃冰箱中备用。另取川贝母对照药材0.1 g，同法制成对照药材模板DNA溶液。

    PCR-RELP反应鉴别引物：5’CGTAACAAGG量TCCGTAGGTGAA3’和5’GCTACGTTCTTCATCGAT3^，。PCR反应体系：在200μl离心管中进行，反应总体积为30μl，反应体系包括l0xPCR缓冲液3μl，二氯化镁（25mmol/l）2 .4μl，dNTP（10mmol/l）0.6μl，鉴别引物（30μmol/l）各0.5μl，高保真Taq DNA聚合酶（5U/u1）0.2μl，模板1μl，无菌超纯水21.8μl。将离心管置PCR仪，PCR反应参数：95℃预变性4分钟，循环反应30次（95℃30秒，55-58℃30秒，72℃30秒），72℃延伸5分钟。取PCR反应液，置500μl离心管中，进行酶切反应，反应总体积为20μl，反应体系包括l0×酶切缓冲液2μl，PCR反应液6μl，SwaⅠ（10U/μl）0.5μl，无菌超纯水11..5μl，酶切反应在30℃水浴反应2小时。另取无菌超纯水，同法上述PCR-RELP反应操作，作为空白对照。

电泳检测 照琼脂糖凝胶电泳法（附录0531），胶浓度为1.5%，胶中加入核酸凝胶染色剂GelRed；供试品与对照药材酶切反应溶液的上样量分别为8μl，DNA分子量标记上样量为（0.5μg/μl）。电泳结束后，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外投射仪上检视。供试品凝胶电泳图谱中，在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位置上，在l00-250bp应有两条DNA条带，空白对照无条带。

【检查】水分  不得过15.0%（附录0832第一法）。

总灰分  不得过5.0%（附录2302）。

【浸出物】照醇溶性浸出物测定法（附录2201）项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于9.0%

【含量测定】对照品溶液的制备  取西贝母碱对照品适量，精密称定，加三氯甲炫制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。

标准曲线的制备  精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml，置25ml具塞试管中，分别补加三瓴甲烷至10.0ml，梢密加水5ml、再精密加0.05%溴甲酚绿缓冲液（取溴甲酚绿0.05g，用0.2mol/l氢氧化钠溶液6ml使溶解，加磷酸二氢钾lg，加水使溶解并稀释至l00ml，即得）2ml，密塞，剧烈振摇1分钟，转移至分液漏斗中，放置30分钟。取二氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（附录0401），在415nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法  取本品粉末（过三号筛）约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液3ml，浸润1小时，加三氯甲烷-甲醇（4：1）混合溶液40ml，置80℃水浴加热回流2小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇（4：l）混合溶液洗涤药渣2-3次，洗液并入同一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（4：1）混合溶液至刻度，摇匀。精密显取2-5ml，置25ml具塞试管中，水浴上蒸干，精密加入三氯甲烷l0ml使溶解，照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加水5ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中西贝母碱的重量（mg），计算，即得。

本品按干燥品计算，含总生物喊以西贝母碱（C₂₇H₄₃N0₃）计，不得少于0.050%。

【性味与归经】苦、甘，微寒。归肺、心经。

【功能】淸热润肺，止咳化痰，散结消痈。

【主治】肺热燥咳，久咳少痰，阴虚劳咳，疮痈肿毒，乳痈。

【用法与用量】马、牛15-30g；羊、猪3-10g；犬、猫l-2g；兔、禽0.5-1g。

【注意】不宜与川乌、制川乌、草乌、制草乌、附子同用。

【贮藏】置通风干燥处，防蛀。