3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法

3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法
本法系依据绵羊红细胞经醛化和鞣酸化处理后，具有较强的吸附蛋白质的能力，能将白喉类毒素吸附于红细胞表面上，若遇到供试品中相应抗体，会发生抗原抗体结合，产生特异性凝集，通过比较凝集反应终点测定供试品中白喉抗体效价。
试剂 （1）1%兔血清生理氯化钠溶液 无菌采集兔全血，分离血清，置56℃、3分钟灭能。取0.5ml兔血清加49.5ml生理氯化钠溶液，混匀。
（2）白喉抗体诊断红细胞悬液 用1%兔血清生理氯化钠溶液复溶冻干白喉抗体诊断红细胞至5%悬液。
白喉抗体标准品溶液的制备 用1%兔血清生理氯化钠溶液将白喉抗体标准品稀释至每1ml含0.2HAU。
供试品溶液的制备 用1%兔血清生理氯化钠溶液将供试品稀释4倍。
测定法 在UV型血凝板上，用1%兔血清生理氯化钠溶液将供试品溶液做2倍系列稀释，每孔留25μl，再向每孔加25μl白喉抗体诊断红细胞悬液，置振荡器混匀30~60秒，放湿盒内37℃结合1小时。
在UV型血凝板上，用1%兔血清生理氯化钠溶液将白喉抗体标准品溶液做2倍系列稀释，每孔留25μl，自“再向每孔加25K1白喉抗体诊断红细胞悬液”起，同法操作。
在UV型血凝板上，加1%兔血清生理氯化钠溶液25μl，自“再向每孔加25μl白喉抗体诊断红细胞悬液”起，同法操作，为阴性对照。
阴性对照孔呈典型的“-”，否则试验不成立，应重试。以出现“++”为判定终点，按下式计算供试品白喉抗体效价：


【附注】（1）判定标准
“-”红细胞集中在孔底中央，呈一边缘光滑致密的小红点；
“+”大部分红细胞沉于孔底中央，周围有少量的红细胞；
“++”红细胞部分凝集，孔底中央有一疏松的小红圈；
“+++”大部分红细胞凝集呈均匀分布，孔底中央有很弱的小红圈；
“++++”红细胞凝集呈均匀分布。
（2）血凝板孔要保持清洁干净，避免表面磨损，否则红细胞不易下沉，易出现假阳性。