3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（E玫瑰花环形成抑制试验）

3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（E玫瑰花环形成抑制试验）
本法系依据抗人T细胞免疫球蛋白与人淋巴细胞E受体结合后，可阻止绵羊红细胞与淋巴细胞E受体特异性结合，根据其结合抑制率测定供试品抗人T淋巴细胞免疫球蛋白效价。
试剂 （1）淋巴细胞分离液（Ficoll's液）。
（2）Hank's液。
（3）20%胎牛血清Hank’s液 试验当天取适量灭菌的Hank’s液，加入经56℃、30分钟灭能及羊红细胞吸收过的胎牛血清，配成20%浓度。用0.5mol/L碳酸氢钠溶液或稀盐酸调pH值至7.2~7.4。
（4）1%羊红细胞悬液 颈静脉采羊血于Alsever’s液中，可保存2周。试验前取适量羊红细胞用生理氯化钠溶液洗3次，用20%胎牛血清Hank’s液配成1%羊红细胞悬液。
（5）淋巴细胞悬液 取肝素抗凝新鲜人静脉血加等量生理氯化钠溶液混匀后，缓慢加至等量淋巴细胞分离液液面上，以每分钟2000转离心20分钟，吸出淋巴细胞层细胞，加适量生理氯化钠溶液清洗，以每分钟1200转离心10分钟，弃上清液，沉淀加入适量20%胎牛血清Hank’s液，摇匀，为淋巴细胞原液；用1%醋酸蓝液将淋巴细胞原液稀释20倍，镜检计数淋巴细胞。根据计数结果，用20%胎牛血清Hank’s液将淋巴细胞原液稀释成每1ml含5×10⁶个淋巴细胞，即为淋巴细胞悬液。
供试品溶液的制备 根据供试品效价，用20%胎牛血清Hank’s液将供试品稀释至几个适宜浓度。
测定法 取供试品溶液100μl，加入淋巴细胞悬液100μl，摇匀，置37℃水浴30分钟；加入1%羊红细胞悬液100μl，混匀，室温放置15分钟。以每分钟500转离心5分钟后置2~8℃过夜，每稀释度供试品溶液做2管。次日取出各管，加入当天稀释的0.2%台盼蓝溶液100μl，轻轻摇匀，镜检计数E玫瑰花环形成率（％）。取20%胎牛血清Hank’s液100μl，加入淋巴细胞悬液100μl，自“摇匀，置37℃水浴30分钟”起，同法操作，作对照组。计算E玫瑰花环抑制率（％），以E玫瑰花环抑制率在25%以上的供试品的最高稀释倍数为E玫瑰花环抑制效价。