1146 组胺类物质检查法

1146 组胺类物质检查法
本法系比较组胺对照品（S）与供试品（T）引起豚鼠离体回肠收缩的程度，以判定供试品中所含组胺类物质的限度是否符合规定。
对照品溶液的制备 精密称取磷酸组胺对照品适量，按组胺计算，加水溶解成每1ml中含1.0mg的溶液，分装于适宜的容器内，4～8℃贮存，在确保收缩活性符合要求的条件下，可在3个月内使用。
对照品稀释液的制备 试验当日，精密量取组胺对照品溶液适量，用氯化钠注射液按高、低剂量组（dS2、dS1）配成两种浓度的稀释液，高剂量dS2应不致使回肠收缩达到极限，低剂量dS1所致反应值约为高剂量的一半，调节剂量使反应可以重复出现。一般组胺对照品浴槽中的终浓度为10^-7～10^-9g/ml，注入体积一般0.2～0.5ml为宜，高低剂量的比值（r）为1：0.5左右。调节剂量使低剂量能引起回肠收缩，高剂量不致使回肠收缩达极限，且高低剂量所致回肠的收缩应有明显差别。
供试品溶液的配制 按品种项下规定的限值，照对照品稀释液低剂量（dS1）制成适当的浓度。试验时，一般供试品溶液与对照品稀释液的注入体积应相等。
回肠肌营养液的制备 A液：试验当日，取氯化钠160.0g、氯化钾4.0g、氯化钙（按无水物计算）2.0g、氯化镁（按无水物计算）1.0g与磷酸氢二钠（含12个结晶水）0.10g，加纯化水700ml使溶解，再加入注射用水适量，使成1000ml。B液：取硫酸阿托品0.5mg、碳酸氢钠1.0g、葡萄糖（含1个结晶水）0.5g，加适量注射用水溶解，加A液50.0ml，混合后加注射用水使成1000ml，调节pH值至7.2～7.4。B液应临用前制备。
检查法 取健康合格的成年豚鼠，雌雄均可，雌者无孕，体重250～350g，禁食24小时，迅速处死，立即剖腹取出回肠一段（选用远端肠段，该段最敏感）仔细分离肠系膜，注意避免因牵拉使回肠受损，剪取适当长度，用注射器抽取上述溶液B，小心冲洗去除肠段的内容物。将肠段下端固定于离体器官恒温水浴装置的浴槽底部，上端用线与记录装置相连；浴槽中事先放入一定量的B液（约10～30ml），连续通入95％O2和5％CO2的混合气体，维持恒温（34～36℃），用适当方法记录该回肠收缩幅度。如果使用杠杆，其长度应能使肠段的收缩放大约20倍。选择1g左右的预负荷，可根据其灵敏度加以调节。回肠放入浴槽后，静置约15～30分钟，方可开始注入药液。每次注入药液前，要用B液冲洗浴槽2～3次。相邻两次给药的间隔时间应一致（约2分钟），每次给药前应在前一次反应恢复稳定后进行。
在上述高低剂量范围内选定对照品稀释液的剂量（dS1、dS2）和供试品溶液按品种项下规定的剂量（dT），照下列次序准确注入浴槽6个剂量：dS2、dSl、dT、dT、dS1、dS2，如dS2所致的反应值大于dS1所致反应值并且可重复时判定试验有效。如供试品溶液引起回肠收缩，分别将第二个剂量dS1与第四个剂量dT、第五个剂量dS1与第三个剂量dT所致反应值进行比较，若dT所致反应值均不大于dS1所致反应值，即判定供试品组胺类物质检查符合规定；若dT所致反应值均大于dSl所致反应值，即判定供试品组胺类物质检查不符合规定；否则应另取动物按初试方法进行复试，复试结果若dT所致反应值均不大于dS1所致反应值，即判定供试品组胺类物质检查符合规定；只要一个dT所致反应值大于dS1所致反应值，即判定供试品组胺类物质检查不符合规定。如供试品不引起回肠收缩，则按照限值剂量在供试品溶液中加入组胺对照品高、低剂量，并按下列次序准确注入dS2、dS1+T、dS2+T、dS1，重复一次，若供试品组胺溶液产生的收缩与对应组胺对照液高、低剂量的收缩基本一致，可判定供试品组胺类物质检查符合规定；若供试品组胺溶液产生的收缩与对应组胺对照液高、低剂量的收缩不相符，即减少或无收缩，或不能重复出现，则此试验结果无效，应另取动物重试。组胺类物质检查不能得到有效结果时，可进行供试品的降压物质检查。