冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）

冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）Donggan Renyong Kuangquanbing Yimiao （Vero Xibao）Rabies Vaccine （Vero Cell） for Human Use, Freeze-dried
本品系用狂犬病病毒固定毒接种于Vero细胞，经培养、收获、浓缩、灭活病毒、纯化后，加入适宜稳定剂冻干制成。用于预防狂犬病。
1 基本要求
生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2 制造
2.1 生产用细胞
生产用细胞为Vero细胞。
2.1.1 细胞管理及检定
应符合“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。各级细胞库细胞代次应不超过批准的限定代次。
取自同批工作细胞库的1支或多支细胞，经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。
2.1.2 细胞制备
取工作细胞库中的1支或多支细胞，细胞复苏、扩增至接种病毒的细胞为一批。将复苏后的单层细胞用胰蛋白酶或其他适宜的消化液进行消化，分散成均匀的细胞，加入适宜的培养液混合均匀，置37℃培养成均匀单层细胞。
2.2 毒种
2.2.1 名称及来源
生产用毒种为狂犬病病毒固定毒CTN-1V株、aGV株或经批准的其他Vero细胞适应的狂犬病病毒固定毒株。
2.2.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。各种子批代次应不超过批准的限定代次。狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在Vero细胞上传代，至工作种子批传代次数应不超过35代；aGV株在Vero细胞上传代，至工作种子批传代次数应不超过15代。
2.2.3 种子批毒种的检定
主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1～2.2.3.4项检定。
2.2.3.1 鉴别试验
采用小鼠脑内中和试验鉴定毒种的特异性。将毒种做10倍系列稀释，取适宜稀释度病毒液分别与狂犬病病毒特异性免疫血清（试验组）和阴性血清（对照组）等量混合，试验组与对照组的每个稀释度分别接种11～13g小鼠6只，每只脑内接种0.03ml，逐日观察，3天内死亡者不计（动物死亡数量应不得超过试验动物总数的20%），观察14天。中和指数应不低于500。
2.2.3.2 病毒滴定
将毒种做10倍系列稀释，每个稀释度脑内接种体重为11～13g小鼠至少6只，每只脑内接种0.03ml，逐日观察，3天内死亡者不计（动物死亡数量应不得超过试验动物总数的20%），观察14天。病毒滴度应不低于7.5 1g LD₅₀/ml。
2.2.3.3 无菌检查
依法检查（通则1101），应符合规定。
2.2.3.4 支原体检查
依法检查（通则3301），应符合规定。
2.2.3.5 外源病毒因子检查
依法检查（通则3302），应符合规定。
2.2.3.6 免疫原性检查
用主种子批毒种制备疫苗，腹腔注射体重为12～14g小鼠，每只0.5ml，免疫2次，间隔7天，为试验组。未经免疫的同批小鼠为对照组。初免后的第14天，试验组和对照组分别用10倍系列稀释的CVS病毒脑腔攻击，每只注射0.03ml，每个稀释度注射10只小鼠，逐日观察，3天内死亡者不计（动物死亡数量应不得超过试验动物总数的20%），观察14天。保护指数应不低于100。
2.2.4 毒种保存
毒种应于-60℃以下保存。
2.3 原液
2.3.1 细胞制备
按2.1.2项进行。
2.3.2 培养液
培养液为含适量灭能新生牛血清的MEM、199或其他适宜培养液。新生牛血清的质量应符合规定（通则3604）。
2.3.3 对照细胞外源病毒因子检查
依法检查（通则3302），应符合规定。
2.3.4 病毒接种和培养
细胞培养成致密单层后，将毒种按0.01～0.1MOI接种细胞（同一工作种子批毒种应按同一MOI接种），置适宜温度下培养一定时间后，弃去培养液，用灭菌PBS或其他适宜洗液冲洗去除牛血清，加入适量维持液，置33～35℃继续培养。
2.3.5 病毒收获
经培养适宜时间，收获病毒液。根据细胞生长情况，可换以维持液继续培养，进行多次病毒收获。检定合格的同一细胞批生产的同一次病毒收获液可合并为单次病毒收获液。
2.3.6 单次病毒收获液检定
按3.1项进行。
2.3.7 单次病毒收获液保存
于2～8℃保存不超过30天。
2.3.8 单次病毒收获液合并、浓缩
检定合格的同一细胞批生产的单次病毒收获液可进行合并。合并后的病毒液，经超滤或其他适宜方法浓缩至规定的蛋白质含量范围。
2.3.9 病毒灭活
于浓缩后的病毒收获液中按1：4000的比例加入β-丙内酯，置适宜温度、在一定时间内灭活病毒，并于适宜的温度放置一定的时间，以确保β-丙内酯完全水解。病毒灭活到期后，每个病毒灭活容器应立即取样，分别进行病毒灭活验证试验。
2.3.10 纯化
灭活后的病毒液采用柱色谱法或其他适宜的方法进行纯化，纯化后加入适量人血白蛋白或其他适宜的稳定剂，即为原液。
2.3.11 原液检定
按3.2项进行。
2.4 半成品
2.4.1 配制
将原液按规定的同一蛋白质含量或抗原含量进行配制，且总蛋白质含量应不高于80μg/剂，加入适宜的稳定剂即为半成品。
2.4.2 半成品检定
按3.3项进行。
2.5 成品
2.5.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.5.2 分装及冻干
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.5.3 规格
按标示量复溶后每瓶0.5ml或1.0ml。每1次人用剂量为0.5ml或1.0ml，狂犬病疫苗效价应不低于2.5IU。
2.5.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 单次病毒收获液检定
3.1.1 病毒滴定
按2.2.3.2项进行，病毒滴度应不低于6.0 1g LD₅₀/ml。
3.1.2 无菌检查
依法检查（通则1101），应符合规定。
3.1.3 支原体检查
依法检查（通则3301），应符合规定。
3.2 原液检定
3.2.1 无菌检查
依法检查（通则1101），应符合规定。
3.2.2 病毒灭活验证试验
取灭活后病毒液25ml接种于Vero细胞，每3cm²单层细胞接种1ml病毒液，37℃吸附60分钟后加入细胞培养液，培养液与病毒液量比例不超过1：3，每7天传1代，培养21天后收获培养液，混合后取样，脑内接种体重为11～13g小鼠20只，每只0.03ml，3天内死亡者不计（动物死亡数量应不得超过试验动物总数的20%），观察14天，应全部健存。
3.2.3 蛋白质含量
取纯化后未加入人血白蛋白的病毒液，依法测定（通则0731第二法），应不高于80μg/剂。
3.2.4 抗原含量
可采用酶联免疫法，应符合批准的要求。
3.3 半成品检定
无菌检查
依法检查（通则1101），应符合规定。
3.4 成品检定
除水分测定外，按标示量加入所附灭菌注射用水，复溶后进行以下各项检定。
3.4.1 鉴别试验
采用酶联免疫法检查，应证明含有狂犬病病毒抗原。
3.4.2 外观
应为白色疏松体，复溶后应为澄明液体，无异物。
3.4.3 渗透压摩尔浓度
依法测定（通则0632），应符合批准的要求。
3.4.4 化学检定
3.4.4.1 pH值
应为7.2～8.0（通则0631）。
3.4.4.2 水分
应不高于3.0%（通则0832）。
3.4.5 效价测定
应不低于2.5IU/剂（通则3503）。
3.4.6 热稳定性试验
疫苗出厂前应进行热稳定性试验。于37℃放置28天后，按3.4.5项进行效价测定，应合格。
3.4.7 牛血清白蛋白残留量
应不高于50ng/剂（通则3411）。
3.4.8 抗生素残留量
生产过程中加入抗生素的应进行该项检查。采用酶联免疫法，应不高于50ng/剂。
3.4.9 Vero细胞DNA残留量
应不高于100pg/剂（通则3407第一法）。
3.4.10 Vero细胞蛋白质残留量
采用酶联免疫法，应不高于4μg/剂。
3.4.11 无菌检查
依法检查（通则1101），应符合规定。
3.4.12 异常毒性检查
依法检查（通则1141），应符合规定。
3.4.13 细菌内毒素检查
应不高于25EU/剂（通则1143凝胶限度试验）。
4 疫苗稀释剂
疫苗稀释剂为灭菌注射用水，稀释剂的生产应符合批准的要求。灭菌注射用水应符合本版药典（二部）的相关规定。
5 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。
6 使用说明
应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。
冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）使用说明
【药品名称】
通用名称：冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）
英文名：称：Rabies Vaccine （Vero Cell） for Human Use， Freeze-dried
汉语拼音：Donggan Renyong Kuangquanbing Yimiao （Vero Xibao）
【成分和性状】 本品系用狂犬病病毒固定毒接种Vero细胞，经培养、收获、浓缩、灭活病毒、纯化后，加入适宜的稳定剂冻干制成。为白色疏松体，复溶后为澄明液体，不含任何防腐剂。
有效成分：灭活的狂犬病病毒固定毒。
辅料：应列出全部批准的辅料成分。
疫苗稀释剂：灭菌注射用水。
【接种对象】 凡被狂犬或其他疯动物咬伤、抓伤时，不分年龄、性别应立即处理局部伤口（用清水或肥皂水反复冲洗后再用碘酊或酒精消毒数次），并及时按暴露后免疫程序注射本疫苗；凡有接触狂犬病病毒危险的人员（如兽运、动物饲养员、林业从业人员、屠宰场工人、狂犬病实验人员等）按暴露前免疫程序注射本疫苗。
【作用与用途】 接种本疫苗后，可刺激机体产生抗狂犬病病毒免疫力。用于预防狂犬病。
【规格】 复溶后每瓶0.5ml或1.0ml。每1次人用剂量为0.5ml或1.0ml，狂犬病疫苗效价应不低于2.5IU。
【免疫程序和剂量】 （1）按标示量加入所附灭菌注射用水，待疫苗复溶并摇匀后注射。
（2）于上臂三角肌肌内注射，幼儿可在大腿前外侧区肌内注射。
（3）暴露后免疫程序：一般咬伤者于0天（第1天，当天）、3天（第4天，以下类推）、7天、14天和28天各注射本疫苗1剂，全程免疫共注射5剂，儿童用量相同。对有下列情形之一的，建议首剂狂犬病疫苗剂量加倍给予：
①注射疫苗前一天或更早一些时间内注射过狂犬病人免疫球蛋白或抗狂犬病血清的慢性病人。
②先天性或获得性免疫缺陷病人。
③接受免疫抑制剂（包括抗疟疾药物）治疗的病人。
④老年人。
⑤于暴露后48小时或更长时间后才注射狂犬病疫苗的人员。
暴露后免疫程序按下述伤及程度分级处理：
Ⅰ级暴露 触摸动物，被动物舔及无破损皮肤，一般不需处理，不必注射狂犬病疫苗；
Ⅱ级暴露 未出血的皮肤咬伤、抓伤，应按暴露后免疫程序接种狂犬病疫苗；
Ⅲ级暴露 一处或多处皮肤出血性咬伤或被抓伤出血，可疑或确诊的疯动物唾液污染黏膜，破损的皮肤被舔应按暴露后程序立即接种狂犬病疫苗和抗狂犬病免疫血清或狂犬病人免疫球蛋白。抗狂犬病血清按40IU/kg给予，或狂犬病人免疫球蛋白按20IU/kg给予，将尽可能多的抗狂犬病血清或狂犬病人免疫球蛋白做咬伤局部浸润注射，剩余部分肌内注射，抗狂犬病血清或狂犬病人免疫球蛋白仅为单次应用。
（4）暴露前免疫程序：于0天、7天、21天或28天各注射本疫苗1剂，全程免疫共注射3剂。
（5）对曾经接种过狂犬病疫苗的一般患者再需接种疫苗的建议：
① 1年内进行过全程免疫，被可疑疯动物咬伤者，应于0天和3天各注射1剂疫苗。
② 1年前进行过全程免疫，被可疑疯动物咬伤者，则应全程接种疫苗。
③ 3年内进行过全程免疫，并且进行过加强免疫，被可疑疯动物咬伤者，则应于0天和3天各注射1剂疫苗。
④ 3年前进行过全程免疫，并且进行过加强免疫，被可疑疯动物咬伤者，应全程接种疫苗。
【不良反应】
常见不良反应：
（1）一般接种疫苗后24小时内，注射部位可出现红肿、疼痛、瘙痒，一般不需处理，即可自行缓解。
（2）全身性反应可有轻度发热、无力、头痛、眩晕、关节痛、肌肉痛、呕吐、腹痛等，一般不需处理，即自行消退。
罕见不良反应：
短暂中度以上发热反应：应采用物理方法及药物对症处理，以防高热惊厥。
极罕见不良反应：
（1）过敏性皮疹：一般接种疫苗后72小时内出现荨麻疹，出现反应时，应及时就诊，给予抗过敏治疗。
（2）过敏性休克：一般接种疫苗后1小时内发生。应及时注射肾上腺素等抢救措施进行治疗。
（3）过敏性紫癜：出现过敏性紫癜反应时应及时就诊，应用皮质固醇类药物给予抗过敏治疗，治疗不当或不及时有可能并发紫癜性肾炎。
（4）出现血管神经性水肿和神经系统反应，应及时就诊。
【禁忌】 由于狂犬病是致死性疾病，暴露后接种疫苗无任何禁忌证。
暴露前接种时：
（1）已知对该疫苗的所含任何成分，包括辅料以及抗生素过敏者。
（2）患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。
（3）患未控制的癫痫和其他进行性神经系统疾病者。
【注意事项】 （1）以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癫痫史者、过敏体质者、哺乳期、妊娠期妇女。
（2）疫苗瓶有裂纹、标签不清或失效者、疫苗复溶后出现浑浊等外观异常者均不得使用。
（3）疫苗开启后应立即使用。
（4）应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟。
（5）忌饮酒、浓茶等刺激性食物及剧烈运动等。
（6）禁止臀部注射，不能进行血管内注射。
（7）抗狂犬病血清或狂犬病人免疫球蛋白不得与疫苗使用同一支注射器，不得在同侧肢体注射。
（8）暴露后免疫应遵循及时、足量、全程的原则。发生过敏者，可到医院就诊，进行抗过敏治疗，完成全程疫苗的注射。
（9）使用皮质类固醇或免疫抑制剂治疗时可干扰抗体产生，并导致免疫接种失败。
（10）严禁冻结。
【贮藏】 于2～8℃避光保存和运输。
【包装】 按批准的执行。
【有效期】按批准的执行。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
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