重组人生长激素

重组人生长激素Chongzu Ren ShengzhangjisuRecombinant Human Growth Hormone

C₉₉₀H₁₅₂₈N₂₆₂O₃₀₀S₇
22 125
本品为重组技术生产的由191个氨基酸残基组成的蛋白质，可加适量赋形剂或稳定剂。每1mg蛋白中含重组人生长激素（C₉₉₀H₁₅₂₈N₂₆₂O₃₀₀S₇）的量应不少于0.91mg。
每1mg无水重组人生长激素相当于3.0单位。
【制法要求】 本品为重组DNA技术产品，生产过程应符合《人用重组DNA技术产品总论^[1]》（三部总论）的要求。
【性状】 本品为白色冻干粉末。
【鉴别】 （1）取本品适量，加0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液（用1mol/L盐酸溶液调节pH值至7.5）溶解并稀释制成每1ml中含重组人生长激素2mg的溶液，作为供试品溶液；另取重组人生长激素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。照相关蛋白质检查项下的色谱条件试验，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
（2）取重组人生长激素对照品，加鉴别（1）项下的缓冲液溶解并稀释制成每1ml中含2mg的溶液，取此液300μl、胰蛋白酶溶液[取经TPCK处理的胰蛋白酶适量，加鉴别（1）项下的缓冲液溶解并制成每1ml中含2mg的溶液]20μl与鉴别（1）项下的缓冲液30μl，混匀，置37℃水浴中4小时，立即置-20℃终止反应，作为对照品溶液；取本品，按对照品溶液的方法制备，作为供试品溶液；另取不加胰蛋白酶溶液的供试品溶液作为空白溶液。照高效液相色谱法（通则0512）试验，用辛基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm）；以0.1%三氟醋酸溶液为流动相A，以含0.1%三氟醋酸的90%乙腈溶液为流动相B；流速为每分钟1.0ml；柱温为35℃；检测波长为214nm。按下表进行梯度洗脱。取空白溶液，对照品溶液和供试品溶液各100μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，扣除空白溶液色谱峰后，供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致。
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时间（分钟）
流动相A（%）
流动相B（%）
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0
100
0
20
80
20
45
75
25
70
50
50
75
20
80
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（3）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
（4）取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，取此溶液90μl，加两性电解质10μl和甲基红试液2μl，混匀，作为供试品溶液；另取重组人生长激素对照品，同法制备，作为对照品溶液。取对照品溶液和供试品溶液各10μl，加至上样孔，照等电聚焦电泳法（通则0541第六法）试验，供试品溶液主带位置应与对照品溶液主带位置一致。
【检查】 总蛋白 取本品适量，精密称定，加磷酸钾缓冲液（取磷酸二氢钾1.70g，加水400ml溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，用水稀释至500ml）溶解并定量稀释成在最大吸收波长处（约280nm）吸光度在0.5～1.0的溶液，作为供试品溶液。照紫外-可见分光光度法（通则0401）测定，记录最大吸收波长（约280nm）和320nm波长处的吸光度（A_max和A₃₂₀），按下式计算供试品溶液中总蛋白的含量，以mg计。
总蛋白含量=V（A_max-A₃₂₀）/0.82
式中 V为供试品溶液的体积。
相关蛋白质 取本品适量，加鉴别（1）项下的缓冲液溶解并稀释制成每1ml中含重组人生长激素2mg的溶液，作为供试品溶液。照高效液相色谱法（通则0512）测定，用丁基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm）；以鉴别（1）项下的缓冲液-正丙醇（71：29）为流动相，调节流动相中正丙醇比例使重组人生长激素主峰保留时间为30～36分钟；流速为每分钟0.5ml；柱温为45℃，检测波长为220nm。取系统适用性溶液[取重组人生长激素对照品，加鉴别（1）项下的缓冲液溶解并稀释制成每1ml中含2mg的溶液，过滤除菌，室温放置24小时]20μl，注入液相色谱仪，重组人生长激素主峰与脱氨的重组人生长激素峰之间的分离度应不小于1.0，重组人生长激素峰的拖尾因子应为0.9～1.8。取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算，总相关蛋白质不得大于6.0%。
高分子蛋白质 取本品适量，照含量测定项下方法检查，除去保留时间大于主峰的其他峰面积，按峰面积归一化法计算，保留时间小于主峰的所有峰面积之和不得大于4.0%。
水分 取本品，照水分测定法（通则0832第一法）测定，含水分不得过10.0%。
无菌 取本品，用适量溶剂溶解后，经薄膜过滤法处理，依法检查（通则1101），应符合规定。
细菌内毒素 取本品，依法检查（通则1143），每1mg重组人生长激素中含内毒素的量应小于5.0EU。
菌体蛋白残留量 取本品适量，依法检查（通则3413^[2]），每1mg重组人生长激素中菌体蛋白残留量不得过10ng。
外源性DNA残留量 取本品适量，依法检查（通则3408^[3]），每1剂量重组人生长激素中宿主DNA不得过10ng。
生物活性 取本品，照生长激素生物测定法（通则1219）依法检查，每1mg蛋白中含生长激素不得少于2.5单位。（每年至少测定一次）
【含量测定】 照分子排阻色谱法（通则0514）测定。
色谱条件与系统适用性试验 以适合分离分子量为5000～60 000球状蛋白的亲水改性硅胶为填充剂；以异丙醇-0.063mol/L磷酸盐缓冲液（取无水磷酸氢二钠5.18g、磷酸二氢钠3.65g，加水950ml，用磷酸调节pH值至7.0，用水制成1000ml）（3：97）为流动相；流速为每分钟0.6ml；检测波长为214nm。取重组人生长激素单体与二聚体混合物对照品，加0.025mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）[取0.063mol/L磷酸盐缓冲液（1→2.5）]溶解并稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，重组人生长激素单体峰与二聚体峰的分离度应符合要求。
测定法 取本品，精密称定，加0.025mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）溶解并定量稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重组人生长激素对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
【类别】 生长激素类药。
【贮藏】 密闭，2～8℃保存。
【制剂】 注射用重组人生长激素