硫氰酸红霉素
Liuqingsuan Hongmeisu
Erythromycin Thiocyanate
C37H67NO13gHSCN 793.02 本品为红霉素硫氰酸盐。按干燥品计算,每1mg的效价不得少于750红霉素单位。
【性状】本品为白色或类白色的结晶或结晶性粉末;无臭;微有引湿性。
本品在甲醇或乙醇中易溶,在水或三氯甲烷中微溶。
【鉴别】(1)取本品约5mg,加硫酸2ml,缓缓摇匀,即显红棕色。
(2)取本品约5mg,加丙酮2ml使溶解,加盐酸2ml,即显棕黄色,渐变为紫红色,再加三氯 甲烷 2ml,充分振摇,三氯甲烷层显紫蓝色。
(3)取本品约5mg,加水10ml,加三氯化铁试液 2ml,摇匀,溶液显朱红色。
【检查】有关物质 取本品约40mg,置10ml量瓶中,加甲醇4ml使溶解,加磷酸盐溶液(取 磷酸氢二钾11.5g,加水900ml使溶解,用10%磷酸溶液调节pH值至8.0,加水至1000ml)稀释 至刻度,摇匀,作为供试品溶液;精密量取1ml,置100ml量瓶中,用上述磷酸盐溶液-甲醇(3:2) 稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液;取对照溶液适量,用磷酸盐溶液-甲醇(3: 2)定量稀释制成 每1ml中约含4μg的溶液,作为灵敏度溶液。照红霉素组分检查项下的色谱条件,量取灵敏度溶 液100μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,主成分色谱峰峰高的信噪比应大于10.精密量取对照溶 液和供试品溶液各100μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰 杂质C峰面积不得大于对照溶液主峰面积的3倍(3.0%),杂质E与杂质F校正后的峰面积(乘 以校正因子0.08)均不得大于对照溶液主峰面积的2倍(2.0%),杂质D校正后的峰面积(乘以 校正因子2)不得大于对照溶液主峰面积的2倍(2.0%),杂质A、杂质B及其他单个杂质的峰面 积均不得大于对照溶液主峰面积的2倍(2.0%),各杂质校正后的峰面积之和不得大于对照溶液主 峰面积的7倍(7.0%).供试品溶液色谱图中小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计。
硫氰酸盐 取本品约0.1g,精密称定,置50ml棕色量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,精密 量取2ml,置50ml棕色量瓶中,加三氯化铁试液 1ml,用甲醇稀释至刻度,作为供试品溶液;取 105℃干燥1小时的硫氰酸钾两份,各约0.1g,精密称定,分别置50ml 量瓶中,加甲醇溶解并稀释 至刻度,摇匀,精密量取5ml,置50ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,再精密量取2ml,置 50ml棕色量瓶中,加三氯化铁试液1ml,用甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液;量取三氯化铁试液1ml,置50ml棕色量瓶中,用甲醇稀释至刻度作为空白溶液。照紫外-可见分光光度法(附 录0401),在492nm波长处分别测定吸光度(供试品溶液、对照品溶液和空白溶液均应在30分钟 内测定),两份对照品溶液单位重量吸光度的比值应在0.985~1.015.按干燥品计算,含硫氰酸盐 应为6.0~8.0%,硫氰酸根与硫氰酸钾的分子量分别为58.08与97.18.
干燥失重 取本品,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥至恒重,减失重量不得过6.0% (附录0831).
炽灼残渣 不得过1.0%(附录0841).
红霉素组分 照高效液相色谱法(附录0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(XTera RP C18柱,4.6mmx 250mm,3.5μm或效能相当的色谱柱);以乙腈-0.2mol/L磷酸氢二钾溶液(用磷酸调节pH值至 7.0)-水(35: 5: 60)为流动相A,以乙腈-0.2mol/L磷酸氢二钾溶液(用磷酸调节pH值至7.0)- 水(50:5: 45)为流动相B,先以流动相A等度洗脱,待红霉素B洗脱完毕后,立即按下表进行线 性梯度洗脱;检测波长为210nm;柱温为65℃.精密称取红霉素标准品约40mg,置10ml量瓶中, 加甲醇4ml使溶解,用有关物质检查项下的磷酸盐溶液稀释至刻度,摇匀,取100μl,注入液相色 谱仪,记录色谱图,红霉素A峰的拖尾因子应不大于2.0.取红霉素系统适用性对照品40mg,置 10ml量瓶中,加甲醇4ml使溶解,加上述磷酸盐溶液至刻度,摇匀,取100μl,注入液相色谱仪, 记录色谱图,应与红霉素系统适用性对照品的标准图谱一致,红霉素A峰的保留时间约为23分 钟,杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E和杂质F的相对保留时间分别约为0.4、0.5、0.9、 1.6、2.3和1.8,红霉素B和红霉素C的相对保留时间分别约为1.7和0.55,杂质B峰和红霉素C 峰、红霉素B峰和杂质F峰之间的分离度应不小于1.2,杂质C峰和红霉素A峰之间的分离度应符 合要求。
测定法 精密称取本品约40mg,置10ml量瓶中,加甲醇4ml使溶解,加上述磷酸盐溶液至刻 度,摇匀,作为供试品溶液;精密称取红霉素标准品约40mg,置10ml量瓶中,加甲醇4ml使溶 解,加上述磷酸盐溶液至刻度,摇匀,作为标准品溶液(1);精密量取标准品溶液(1)1ml,置 100ml量瓶中,用上述磷酸盐溶液-甲醇(3: 2)稀释至刻度,摇匀,作为标准品溶液(2).精密 量取供试品溶液与标准品溶液(1)、标准品溶液(2)各100μ,分别注入液相色谱仪,记录色谱 图。按外标法以标准品溶液(1)中红霉素A的峰面积计算供试品中红霉素A的含量,按干燥品计 算,不得少于80.0%;按外标法以标准品溶液(2)中红霉素A的峰面积计算供试品中红霉素B和 红霉素C的含量,按干燥品计算,均不得过3.0%.
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 B tn+2 +9 t+10 t+20 | 100 100 0 Q 00 100 | 0 0 100 100 0 0 |
注: 4为红霉素B的保留时间。
【含量测定】 精密称取本品适量,加乙醇(10mg红霉素加乙醇1ml)使溶解,用灭菌水定量 稀释制成每1ml约含1000单位的溶液。照抗生素微生物检定法(附录1201)测定。1000红霉素单 位相当于1mg的CgH,NOs.
【类别】大环内酯类抗生素。
【贮藏】密封,在干燥处保存。
【制剂】硫氰酸红霉素可溶性粉
附:
红霉素组分参考色谱图