土霉素

 C₂₂H₂₄N₂O₉·2H₂O   496.46

本品为6-甲基-4-（二甲氨基）-3,5,6,10,12,12α-六羟基-1,11-二氧代-1,4,4α,5,5α,6,11,12α-八氢-2-并四苯甲酰胺二水物。按无水物计算，含土霉素（C₂₂H₂₄N₂O₉）不得少于95.0%。

【性状】本品为淡黄色至暗黄色的结晶性粉末或无定形粉末；无臭；在日光下颜色变暗，在碱溶液中易破坏失效。

本品在乙醇中微溶，在水中极微溶解;在氢氧化钠试液和稀盐酸中溶解。

比旋度  取本品，精密称定，加0.1 mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1 ml中含l 0mg的溶液，避光放置1小时后，在25℃依法测定（附录0621），比旋度为-203^o至-216^o。   

【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加硫酸2ml，即显深朱红色；再加水1ml，溶液

变为黄色。

（2）取本品与土霉素对照品，分别加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液与对照品溶液；另取土霉素与盐酸四环素对照品，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中各约含1mg的混合溶液，照薄层色谱法（附录0502）试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一薄层板^①上，以乙酸乙醋-三氯甲烷-丙酮（2:2:1）溶液200ml中加4%乙二胺四醋酸二钠溶液（pH7.0 ） 5ml作为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，混合溶液应显两个完全分离的斑点，供试品溶液所显主斑点的位置和荧光应与对照品溶液主斑点的位置和荧光相同。

（3）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照

品溶液主峰的保留时间一致。

以上（2）、（3）两项可选做一项。

【检查】酸度  取本品，加水制成每1ml中含10mg的混悬液，依法测定（附录0631），pH值应为4.5～7.0。

有关物质  取本品约25mg，精密称定，置50mI量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液5ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液;精密量取2ml,置100ml量瓶中，用0.01 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件试验，精密量取对照溶液和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍，供试品溶液色谱图中如有杂

质峰，2-乙酸-2-去酰胺土霉素的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1.75（3.5%），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（2.0%）。

杂质吸光度  取本品，加0.1mol/L盐酸甲醇溶液（1→100）溶解并定量稀释制

成每1ml中含2.0mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录0401），于1小时内，在430nm的波长处测定，吸光度不得过0.25。另取本品，加上述盐酸甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液，在490nm的波长处测定，吸光度不得过0.20。

水分  取本品，照水分测定法（附录0832第一法A）测定，含水分不得过6.0%～9.0%。

异常毒性  取本品，按每25mg加0.1 mol/L盐酸溶液1 ml使溶解，再加氯化钠注射液制成每1mI中含2mg的溶液，依法测定（附录1141），按静脉注射法给药，应符合规定（供注射用）。

重金属  取本品1.0g，依法检查（附录0821第二法），含重金属不得过百万分之二十（供注射用）。

细菌内毒素  取本品，用0.1mol/L无内毒素盐酸溶液使溶解，依法检查（附录1143 ），每1mg土霉素中含内毒素的量应小于0.40EU（供注射用）。

【含量测定】照高效液相色谱法（附录0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸铵溶

液[0.25mol/L醋酸铵溶液-0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液-三乙胺（100：10：1），用醋酸调节pH值至7.5]-乙腈（88：12）为流动相；检测波长为280nm。取4-差向四环素对照品适量，用0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液；取土霉素对照品（约含2-乙酰-2-去酰胺土霉素3%）适量，用少量0.1mol/L盐酸溶液溶解，用水稀释制成每1ml中约含土霉素0.5mg的溶液，取上述两种溶液（1：24）混合制成每1ml中约含4-差向四环素20μg和土霉素480μg（约含2-乙酰-2-去酰胺土霉素14.5μg）的混合溶液作为分离度试验用溶液。取该溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序为：4-差向四环素峰（与土霉素峰相对保留时间约为0.9）、土霉素峰、2-乙酰-2-去酰胺土霉素峰（与土霉素峰相对保留时间约为1.1）。土霉素峰的保留时间约为12分钟。4-差向四环素峰与土霉素峰分离度应大于2.0，土霉素峰与2-乙酰-2-去酰胺土霉素峰的分离度应大于2.5。

测定法  取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液5ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用0.01mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另

取土霉素对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中C₂₂H₂₄N₂O₉的含量。即得。

【类别】四环素类抗生素。

【贮藏】遮光，密封，在干燥处保存。

【制剂】土霉素片

1. 层板的制备:取硅藻土适量.以用浓氨溶液调节pH值至7.0的4%乙二胺四醋酸酸二钠-甘油（95:5）为黏合剂，将干燥硅藻土-黏合剂〔1g:3ml ）混合调成糊状后，涂布成厚度约为0.4mm的薄层板，在室温下放置干燥，在105℃干燥1小时，备用。