盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB)俗称瘦肉精,又名氨哮素、克喘素,化学名为4-氨基-α-[(叔丁基氨基)甲基]-3,5-二氯苄醇盐酸盐,常温下为白色或微黄粉末状固体,是一种β2-肾上腺素能激动剂。20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。80年代,由于盐酸克伦特罗能促进猪生长,提高瘦肉率,而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。
目前对猪体内盐酸克伦特罗残留的检测方法主要有胶体金法、酶联免疫法、气相色谱法及液相色谱-质谱联用法。
胶体金法
胶体金法是通过盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗-血清白蛋白偶联物竞争结合抗盐酸克伦特罗单克隆抗体-胶体金复合物,使试纸上反应线颜色发生变化,以判定样品中盐酸克伦特罗的含量。当检样中盐酸克伦特罗浓度低于最低检测水平时,胶体金中的抗盐酸克伦特罗单抗-胶体金复合物与T线上的偶联物结合,T线呈色与C线相近;当检样中盐酸克伦特罗浓度>0.5ng/mL时,T线显色比C线浅或完全看不到线,且盐酸克伦特罗浓度越高T线显色越浅,从而作出判定。在筛查饲养场、生猪中转站、屠宰场时可采用胶体金法进行快速检测,不须添置任何设备,不须掌握更多专业技能,在十多分钟内即可得到检测结果,适用于大量样品的测定,缺点是假阳性率较高。
酶联免疫法
酶联免疫法是微孔板加入盐酸克伦特罗抗体,经过孵育及洗涤步骤后,加入盐酸克伦特罗酶标记物、标准和样品溶液。盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗酶标记物竞争,盐酸克伦特罗抗结合的盐酸克伦特罗酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质和发色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入终止液后由蓝色转化为黄色,在450nm处测量吸光强度,吸光值与样品中盐酸克伦特罗浓度呈反比。目前,国内用于盐酸克伦特罗残留检测的试剂盒已经商品化,具有成本低、速度快、灵敏度高、仪器设备简单等优点,适于批量样品的快速分析测定.检测精度可达ng/mL级,此法假阳性率较少,因此国内外大都
将胶体金法作为筛选法。
气相色谱法
气相色谱法是将样品经固相萃取、衍生化后用ECD检测器检测,以外标法多点校准定量,测得动物组织中盐酸克伦特罗的峰面积与样品浓度在0.005～1.0μg/ml范围内呈良好的线性关系,相关系数大于0.999,肉样的加标回收率在70％～80％,最低检出限为1μg/kg。气相色谱法具有检测精密度高的优点,但同时也具有检测过程烦琐,耗时长、不能定性等缺点。